丹東蒲公英（Taraxacum.antungense Kitag.）為菊科（Compositae）蒲公英屬（Taraxacum F.H.Wigg.）多年生草本植物,20世紀60年代有學者提出蒲公英對重金屬的富集作用在改良土壤方面有優(yōu)勢潛力（Mossop et al,2000）。為了探究蒲公英可以大量吸附重金屬的原因和在吸附過程中相關(guān)的分子機理,本試驗在丹東蒲公英轉(zhuǎn)錄組測序基礎(chǔ)上,在NCBI數(shù)據(jù)庫用Blast比對篩選出1條NRAMP基因序列,通過克隆得到Ta NRAMP基因,并運用軟件進行生物信息學分析。再運用實時熒光定量PCR手段確定在Cd脅迫下Ta NRAMP基因的表達量變化。最后構(gòu)建了PRI101-Ta NRAMP過表達載體,并通過農(nóng)桿菌介導的方式轉(zhuǎn)到丹東蒲公英中,來最終驗證NRAMP基因的功能。試驗結(jié)果如下:1.在丹東蒲公英中成功克隆到NRAMP基因,長1647 bp,編碼548個氨基酸。Ta NRAMP氨基酸序列的保守結(jié)構(gòu)域與擬南芥At NRAMP蛋白的相同,系統(tǒng)發(fā)育樹結(jié)果顯示與其親緣關(guān)系最接近的是菊科植物向日葵;二級結(jié)構(gòu)預測結(jié)果表明該蛋白由39.42%ɑ-螺旋,19.16%β... 

【文章來源】：沈陽農(nóng)業(yè)大學遼寧省

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

本文技術(shù)路線

16 C 連接 2 小時。表 4 pMD19-T-TaNRAMP 連接反應體系Table 4 Ligation Reaction System of pMD19-T vector組分Components體積（μl）Volume (μl)TaNRAMP 基因 4.5pMD19-T Vector 0.5Solution I 5Total 10轉(zhuǎn)化具體試驗步驟如下：（1）將感受態(tài)細胞與連接產(chǎn)物混勻；（2）冰浴 30min，42 C 熱激 90s，冰浴 2min；（3）加入 200μlLB 液體培養(yǎng)基， 200rpm，37 C 培養(yǎng) 1 小時；（4）取 200μl 菌液均勻涂布在 Amp+培養(yǎng)基上，倒置培養(yǎng)（37 C、12h）。

TaNRAMP 基因的瓊脂糖凝膠電rophoresis of the PCR Product oTaNRAMP 基因 2.Marker DL2 TaNRAMP gene 2.Marker DL2MP 的菌液 PCR 鑒定結(jié)果所示，PCR 結(jié)果顯示用 M帶，說明 TaNRAMP 基因大腸桿菌中。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]大豆鎘運輸相關(guān)GmNramp1基因的克隆與表達[J]. 李楠,高振蕊,張曉娜,崔敏龍.  生態(tài)學雜志. 2016(12)
[2]煙草NtNramp1-1基因克隆及特征分析[J]. 焦芳嬋,李文正,吳玉萍,宋中邦,高玉龍,王丙武,李永平.  分子植物育種. 2015(11)
[3]兩種基因型番茄對鎘脅迫響應差異[J]. 趙首萍,張永志,張棋,王鋼軍,葉雪珠.  植物營養(yǎng)與肥料學報. 2015(05)
[4]土壤鎘污染現(xiàn)狀及其治理措施研究進展[J]. 盧紅玲,肖光輝,劉青山,彭新德.  南方農(nóng)業(yè)學報. 2014(11)
[5]我國土壤重金屬污染現(xiàn)狀及治理戰(zhàn)略[J]. 周建軍,周桔,馮仁國.  中國科學院院刊. 2014(03)
[6]湘潭某工業(yè)園周邊稻田土壤及稻米鎘污染的風險評價[J]. 唐貞,楊仁斌,雷鳴,唐世榮,宋正國,彭莎.  湖南農(nóng)業(yè)大學學報(自然科學版). 2012(01)
[7]山東壽光不同農(nóng)業(yè)利用方式下土壤鉻的累積特征[J]. 李樹輝,李蓮芳,曾希柏,白玲玉,王道龍.  農(nóng)業(yè)環(huán)境科學學報. 2011(08)
[8]山東壽光不同農(nóng)業(yè)利用方式下土壤鉛的累積特征[J]. 李蓮芳,曾希柏,白玲玉,李樹輝.  農(nóng)業(yè)環(huán)境科學學報. 2010(10)
[9]不同農(nóng)業(yè)利用方式對土壤重金屬累積的影響及原因分析[J]. 白玲玉,曾希柏,李蓮芳,彭暢,李樹輝.  中國農(nóng)業(yè)科學. 2010(01)
[10]不同農(nóng)業(yè)利用方式下土壤銅和鋅的累積[J]. 李蓮芳,曾希柏,白玲玉.  生態(tài)學報. 2008(09)

博士論文
[1]超積累植物東南景天Cd耐性和積累的分子機制[D]. 張杰.浙江大學 2015



本文編號：3522360