發(fā)布時間：2021-11-23 05:37

　　大麥?zhǔn)鞘澜绲谒拇蠛坦阮愖魑?因其抗逆性強、適應(yīng)性廣而被廣泛種植,其基因組較小,是麥類遺傳研究的模式植物之一。目前大麥的轉(zhuǎn)基因研究較少,有嚴(yán)重的基因型依賴性,而且中國還沒有安全型轉(zhuǎn)基因大麥植株的報道,因此建立商業(yè)化推廣大麥品種的無篩選標(biāo)記遺傳轉(zhuǎn)化體系,對于大麥的遺傳改良和基因功能研究具有重要意義。本研究建立了商業(yè)化大麥品種Vlamingh的農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化體系,成功將雙T-DNA載體p WMB123轉(zhuǎn)入大麥中,獲得了穩(wěn)定遺傳的轉(zhuǎn)基因植株。并且通過后代遺傳分離成功獲得了無篩選標(biāo)記轉(zhuǎn)基因植株。同時利用CRISPR/Cas9系統(tǒng)對大麥皮裸基因Hv Nud及其在小麥中的同源基因Ta Nud進行了定點突變,獲得了基因編輯突變體。主要研究結(jié)果如下:1、對大麥品種Vlamingh的培養(yǎng)基成分及培養(yǎng)步驟進行了摸索優(yōu)化:發(fā)現(xiàn)在愈傷組織分化階段,培養(yǎng)基中添加1.0 mg/L KT、0.5 mg/L 6-BA和0.05 mg/L NAA明顯促進愈傷組織分化;在轉(zhuǎn)基因植株生根階段,發(fā)現(xiàn)采用添加1.0 mg/L的IBA的SM1培養(yǎng)基（無其他生長素）的生根效果最佳;培養(yǎng)基中添加2.5 mg/L Cu SO₄

【文章來源】：長江大學(xué)湖北省

【文章頁數(shù)】：55 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

大麥愈傷組織在不同培養(yǎng)基上的分化情況

18AB圖3CuSO4對轉(zhuǎn)基因大麥小植株白化現(xiàn)象的影響A：不添加CuSO4；B：添加CuSO4Fig.3TheeffectofcoppersulfateonthealbnismoftransgenicbarleyplantsA:1/2MSmediumwithoutcoppersulfate;B:1/2MSmediumwith2.5mg/Lcoppersulfate雖然一步成苗的大麥植株在添加IBA的1/2MS培養(yǎng)基上生根效果很好，但轉(zhuǎn)基因大麥植株在該培養(yǎng)基上生根效果并不理想。因此，又探索了添加IBA的沒有其他生長素的SM1培養(yǎng)基、DM培養(yǎng)基和BRM培養(yǎng)基的生根效果。結(jié)果表明，大麥轉(zhuǎn)基因植株在僅添加IBA無其他生長素的DM和BRM培養(yǎng)基上雖然生長狀態(tài)較好，但是仍然很難生根，而在添加IBA的無其他生長素的SM1培養(yǎng)基上的生根效果較好。

19SR15SR14SR13SR12SR11SR10SR9SR1SR2SR3SR4SR5SR6SR7SR8圖4大麥再生植株在不同激素配比培養(yǎng)基上的生根情況Fig.4RootingstatusoftransgenicBarleyplantletson15mediawithdifferenthormoneratios


本文編號：3513237