水稻是世界上最重要的糧食作物之一,而鱗翅目昆蟲如螟蟲等是水稻生產(chǎn)中的主要蟲害,常規(guī)的農(nóng)藥防治螟蟲不但增加成本投入,而且還容易誘使昆蟲產(chǎn)生抗藥性。基于單一抗蟲基因容易使昆蟲產(chǎn)生抗性以及公眾對于轉(zhuǎn)基因水稻食用安全性過度擔(dān)憂的現(xiàn)狀,本文從以下兩方面開展了研究:聚合兩個不同的抗蟲基因以培育持久抗蟲水稻新材料;對已有轉(zhuǎn)化體進行鑒定和分析以盡快獲得我們期望的胚乳零表達型抗蟲水稻新材料,并取得了如下研究結(jié)果:一、綠色組織特異表達性抗蟲水稻新材料的檢測與驗證利用PCR技術(shù)從12個不同的轉(zhuǎn)化體中獲得8個純合的轉(zhuǎn)基因株系。通過Southern雜交,篩選到5個單拷貝的材料。對5個轉(zhuǎn)化系中的Cry1Ab/1Ac蛋白進行定量分析,結(jié)果顯示:在分蘗期和灌漿期葉片和莖稈中,5個轉(zhuǎn)化系均能檢測到抗蟲蛋白,葉片中的表達量顯著高于莖稈。五個轉(zhuǎn)化系的Cry1Ab/1Ac蛋白含量在整體水平上比陽性對照浙優(yōu)3號高,部分轉(zhuǎn)化系葉片中的表達量比對照甚至高出10倍左右。在胚乳中,在各轉(zhuǎn)化系內(nèi)檢測值與陰性對照之間沒有顯著差異,顯著低于浙優(yōu)3號的0.23μg/g。此外,田間對轉(zhuǎn)基因植株進行抗蟲鑒定,結(jié)果顯示野生型對照在人工接蟲二化螟后單... 

【文章來源】：浙江大學(xué)浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２．１表迗載體ｐＳＢ１３０－ｒｂｃＳ－ｔｐ－Ｂｔ載體構(gòu)建圖

ＲＢ?ＬＢ??圖２．１表迗載體ｐＳＢ１３０－ｒｂｃＳ－ｔｐ－Ｂｔ載體構(gòu)建圖。??Ｆｉｇｕｒｅ?２．１?Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?ｍａｐ?ｏｆ?ｐｌａｓｍｉｄ?ｖｅｃｔｏｒ?ｐＳＢ１３０－ｒｂｃＳ－ｔｐ－Ｂｔ．??２．４．２目標(biāo)基因鑒定及雜交分析??Ｔ２代從８個轉(zhuǎn)化體分離出４８個左右不同轉(zhuǎn)化系，分別從毎個轉(zhuǎn)化系內(nèi)隨機??選取１２個單株，在分蘗期取樣抽提基因組ＤＮＡ利用ＰＣＲ鑒定Ｃ／７Ｌ４６／以ｃ基因。??選擇轉(zhuǎn)化系內(nèi)所有１２個單株都攜帶基因的轉(zhuǎn)化系，認(rèn)定為純系。共??從８個不同的轉(zhuǎn)化體里各分離到１個純系，即８個純合的轉(zhuǎn)化系進行后續(xù)實驗分??析。８?個轉(zhuǎn)化系分別命名為?ｒｂｃＳ－ｔｐ－Ｂｔ－１、ｒｂｃＳ－ｔｐ－Ｂｔ－２、ｒｂｃＳ－ｔｐ－Ｂｔ－３、ｒｂｃＳ－ｔｐ－Ｂｔ－７、??ｒｂｃＳ－ｔｐ－Ｂｔ－８、ｒｂｃＳ－ｔｐ－Ｂｔ－１０、ｒｂｃＳ－ｔｐ－Ｂｔ－１?１、ｒｂｃＳ－ｔｐ－Ｂｔ－１２。??在分蘗盛期，分別提取上述８個純合的轉(zhuǎn)化系及對照品種的高質(zhì)量基因組??ＤＮＡ進行５ｂｗ／／７ｅＡ７７雜交分析，結(jié)果如圖２．２所示。結(jié)果顯示不同的轉(zhuǎn)化系植株??中插入的基因拷貝數(shù)在１－４個之間，其中單拷貝材料有５個。單拷??貝的材料具有遺傳穩(wěn)定性強、便于分離基因插入位點等優(yōu)點

是浙優(yōu)３號的２－１０倍和２－１１倍。而在同一轉(zhuǎn)化系內(nèi)，分蘗期和灌漿期ＣｒｙｌＡｂ／ｌＡｃ??蛋白的表達量差異不大，說明ＣｒｙｌＡｂ／ｌＡｃ蛋白在整個生育期內(nèi)都能相對穩(wěn)定表??迗（圖２．３）。??２０??

【參考文獻】：
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碩士論文
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本文編號：3509178