(目的)利用線粒體NADH脫氫酶亞基1基因（NADH1）和微衛(wèi)星標(biāo)記進(jìn)行棘球絳蟲感染的基因型和遺傳多樣性分析。（方法）對不同地區(qū)牛、羊肝/肺包囊（8份）、野生鼠肝包囊（4份）和狐貍腸道寄生棘球絳蟲成蟲（2份）共14個(gè)樣本提取DNA后,分別用棘球絳蟲線粒體NADH1基因和微衛(wèi)星標(biāo)記進(jìn)行檢測。（結(jié)果）PCR擴(kuò)增分別得到大小約為510 bp的NADH1核苷酸片段和200～300 bp不等的微衛(wèi)星標(biāo)記片段,產(chǎn)物的長度與引物設(shè)計(jì)的預(yù)期產(chǎn)物長度一致;序列比對發(fā)現(xiàn)不同地區(qū)、不同宿主來源的樣品序列存在堿基的顛/轉(zhuǎn)換和堿基缺失現(xiàn)象;測序發(fā)現(xiàn)8份牛、羊肝/肺包囊樣本均為細(xì)粒棘球蚴G1基因型感染,4份野生鼠肝包囊均為多房棘球蚴感染,2份狐貍腸道寄生棘球絳蟲樣本為多房棘球絳蟲感染。（結(jié)論）線粒體NADH1基因和微衛(wèi)星標(biāo)記均適用于棘球絳蟲種間和種內(nèi)的鑒別、分類及系統(tǒng)進(jìn)化分析研究。 

【文章來源】：草食家畜. 2020,(04)

【文章頁數(shù)】：9 頁

【部分圖文】：

不同地區(qū)棘球絳蟲代表性樣品NADH1基因的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物

利用微衛(wèi)星位點(diǎn)基因引物對上述檢測為陽性的樣品進(jìn)行擴(kuò)增，獲得200～300 bp的目的條帶，與預(yù)期片段大小相符，電泳結(jié)果見圖2。2.3 棘球絳蟲NADH1基因的序列比對及遺傳進(jìn)化分析

將所有陽性樣品NADH1序列通過Clustal X 1.83進(jìn)行比對，去除兩端不準(zhǔn)確序列后獲得的序列長度為508 bp，以C1為代表的4個(gè)分離株（樣品號：C1、C19、A18、S2）基因序列與GenBank中細(xì)粒棘球絳蟲NADH1基因序列（EF367301.1）同源性為100%；以X1為代表的4個(gè)分離株（樣品號：X1、H7、Y13、T）基因序列與GenBank中細(xì)粒棘球絳蟲NADH1基因序列（JX217864.1）同源性為99%；以Em1為代表的2個(gè)分離株（樣品號：Em1和Em2）基因序列與GenBank中多房棘球絳蟲NADH1基因序列（AB668376.1）同源性為98%；以Em5為代表的2個(gè)分離株（樣品號：Em5和Em5-1）基因序列與AB668376.1同源性為99%;1#和2#分離株基因序列均與GenBank中多房棘球絳蟲NADH1基因序列（KY094609.1）同源性為99%，不同株基因的變異位點(diǎn)及堿基序列變化見表5、表6、表7。基于棘球絳蟲NADH1引物擴(kuò)增的基因片段并利用NJ法構(gòu)建了遺傳進(jìn)化樹（圖3），進(jìn)化樹分為3大枝，不同地區(qū)牛/羊感染包蟲病陽性樣品與細(xì)粒棘球絳蟲（EF367301.1和JX217864.1）參考序列歸于一支，不同地區(qū)老鼠和狐貍感染包蟲病陽性樣品與多房棘球絳蟲（AB668376.1和KY094609.1）參考序列歸于一支，細(xì)粒棘球絳蟲G5、G6和G7基因型參考序列歸于一枝，從建立的進(jìn)化樹中可以看出不同地區(qū)牛/羊感染包蟲病病原與細(xì)粒棘球絳蟲親緣關(guān)系較近，基因型屬于G1型，老鼠和狐貍感染包蟲病病原與多房棘球絳蟲親緣關(guān)系較近。2.4 棘球絳蟲微衛(wèi)星位點(diǎn)基因的序列比對及遺傳進(jìn)化分析

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3501296