堿性蛋白酶廣泛應(yīng)用于洗滌劑、食品、制藥、皮革、診斷、廢物管理和白銀回收等行業(yè),具有重要的商業(yè)價(jià)值。本文重點(diǎn)研究了堿性蛋白酶生產(chǎn)菌種的誘變篩選、微生物堿性蛋白酶的生產(chǎn)和發(fā)酵優(yōu)化及堿性蛋白酶基因的克隆與表達(dá)。本研究利用常壓室溫等離子體誘變技術(shù)對(duì)B.subtilis S1-4菌株進(jìn)行誘變,以He作為放電氣體,氣體流量為10 L/min,射頻功率為120 W,誘變時(shí)間為20 s、40 s、60 s、80 s。通過(guò)酪蛋白平板初篩,挑出水解圈較大的14株突變株,再通過(guò)實(shí)驗(yàn)室搖瓶復(fù)篩得到一株高產(chǎn)堿性蛋白酶菌株。經(jīng)形態(tài)觀察和16S rDNA序列的比較分析,將其命名為B.subtilis S1-4-2-21,其堿性蛋白酶活力最高可達(dá)25.4 U/mL,相比原始菌株酶活力提高了約2倍,羽毛降解率提高了4.33%。將酶活力最高的突變株B.subtilis S1-4-2-21進(jìn)行全基因組重測(cè)序,與野生菌株的參考基因組進(jìn)行比較,SNP突變主要發(fā)生在A-C堿基和A-G堿基之間,非同義突變占14%,大部分的SNP突變發(fā)生在基因間序列。InDel突變主要發(fā)生在Shift,CDS區(qū)域序列,該區(qū)域可以引起移碼突變。結(jié)構(gòu)性... 

【文章來(lái)源】：四川師范大學(xué)四川省

【文章頁(yè)數(shù)】：86 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

枯草芽孢桿菌S1-4的生長(zhǎng)曲線

圖 2.2 枯草芽孢桿菌 S1-4 的酶活力曲線Fig.2.2 Enzyme activity curve of B. subtilis S1-4桿菌 S1-4 的雞毛失重率曲線 LB 培養(yǎng)基中培養(yǎng) 120 h，每隔 24 h 取樣，測(cè)定其雞毛的降可以看出，在 0-72 h 雞毛降解率在 30%左右；在 72 h 后，

圖 2.3 枯草芽孢桿菌 S1-4 雞毛降解率曲線Fig.2.3 Degradation rate curve of B. subtilis S1-4 chicken hairs的致死率曲線可以看出，ARTP 誘變具有較高的殺菌能力，誘變時(shí)間致死率有利于篩選優(yōu)良菌株，但是誘變時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，一些

【參考文獻(xiàn)】：
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