面對復(fù)雜而多變的環(huán)境信息,寄生蜂通過學(xué)習(xí)行為高效利用環(huán)境中的化學(xué)信息物質(zhì)從而提高其找到寄主的效率。在生物防治的背景下,利用寄生蜂的學(xué)習(xí)提高其對鉆蛀性害蟲寄生率的研究需求迫切。本實(shí)驗(yàn)基于川硬皮腫腿蜂（Scleroderma sichuanensis Xiao）的學(xué)習(xí)行為,以不同學(xué)習(xí)日齡的川硬皮腫腿蜂雌蜂為研究對象,通過行為學(xué)分析明確了不同學(xué)習(xí)日齡川硬皮腫腿蜂對松墨天牛（Monochamus alternatus Hope）蟲糞和受害松樹揮發(fā)物的學(xué)習(xí)記憶差異。進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測序,并以此為基礎(chǔ)進(jìn)行CREB（cAMP-response element binding protein）基因篩選,采用RT-PCR技術(shù)成功克隆出川硬皮腫腿蜂的2個CREB基因,采用熒光定量PCR技術(shù)分析CREB1、CREB2在不同學(xué)習(xí)日齡川硬皮腫腿蜂中的轉(zhuǎn)錄表達(dá)圖譜,同時分析CREB基因在不同蟲態(tài)和不同學(xué)習(xí)經(jīng)歷成蜂的表達(dá)情況,為探究川硬皮腫腿蜂的學(xué)習(xí)記憶機(jī)制積累研究資料、提供數(shù)據(jù)支持,取得如下結(jié)果:（1）在川硬皮腫腿蜂行為學(xué)研究中發(fā)現(xiàn),對于松墨天牛蟲糞和受害松樹的揮發(fā)物成分,不同種揮發(fā)物對川硬皮腫腿蜂的學(xué)習(xí)刺激作用不同,... 

【文章來源】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)四川省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

Y型嗅覺儀構(gòu)造圖

11Qubie對RNA濃度進(jìn)行精確定量；Agilent2100精確檢測RNA的完整性。4.3.2文庫構(gòu)建與質(zhì)量檢驗(yàn)圖4.2文庫構(gòu)建原理圖Fig.4.2Libraryconstructionschematicdiagram如圖4.2所示，樣品質(zhì)量檢測合格后，用含多胸腺嘧啶的磁珠富集川硬皮腫腿蜂的基因，加入裂解緩沖液將基因分成短片段，然后以短片段核糖核酸為模板，加入六堿基隨機(jī)引物和逆轉(zhuǎn)錄酶合成基因第一鏈，通過試劑盒加入三磷酸鳥嘌呤脫氧核苷酸、DNA聚合酶Ⅰ、糖核酸酶H以及緩沖液合成第二鏈cDNA，雙鏈cDNA通過加入AMPureXP珠純化。為純化后的雙鏈cDNA加上A尾，連接測序接頭，末端修復(fù)。隨后，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，產(chǎn)物使用AMPureXPbeads純化，以獲取文庫。對構(gòu)建成功的文庫首先使用Qubit2.0定量測定，而后稀釋到1.5ng/ul，使用Agilent2100進(jìn)行插入尺寸檢測，最后使用熒光定量PCR對文庫進(jìn)行定量測定，以保證濃度＞2nM供試。4.3.3測序?qū)⑼ㄟ^質(zhì)檢的文庫按有效濃度和預(yù)計(jì)數(shù)據(jù)量結(jié)合后進(jìn)行IlluminaHiSeq2000測

5.1.1 混合揮發(fā)物對比同一日齡的有、無學(xué)習(xí)經(jīng)歷的川硬皮腫腿蜂，經(jīng) X2檢驗(yàn)結(jié)果顯示：與未經(jīng)歷氣味學(xué)習(xí)的川硬皮腫腿蜂相比，學(xué)習(xí)后的川硬皮腫腿蜂對混合揮發(fā)物的趨向性均有不同程度的提高，其中羽化后學(xué)習(xí) 4 天的趨向性達(dá)到顯著，隨著羽化天數(shù)的增加，川硬皮腫腿蜂對于混合揮發(fā)物的趨向性呈現(xiàn)先增高后降低的趨勢，在羽化第四天達(dá)到最高隨后呈下降趨勢，與未學(xué)習(xí)組相比趨向性有明顯提高。（如圖 5.1）日齡 實(shí)驗(yàn)組 對照組 X2檢驗(yàn) P 值Day-old E group CK X2test Value of P

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
[1]孕期高糖飲食對老年子代大鼠學(xué)習(xí)和記憶的影響及相關(guān)機(jī)制的研究[D]. 何阿信.蘇州大學(xué) 2017
[2]松褐天牛氣味結(jié)合蛋白基因的克隆與功能分析[D]. 王娟.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2015
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[7]川硬皮腫腿蜂實(shí)驗(yàn)種群生命表及成蟲貯藏條件的研究[D]. 楊華.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 2008
[8]川硬皮腫腿蜂復(fù)壯技術(shù)研究[D]. 胡霞.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 2006
[9]川硬皮腫腿蜂學(xué)習(xí)行為及松節(jié)油定向培育研究[D]. 謝正華.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 2005
[10]人類基因CREB4的功能初步研究[D]. 高永娟.華東師范大學(xué) 2005



本文編號：3474671