目的利用反義寡合甘酸技術抑制肌肉生長抑制素（myostatin,MSTN）的表達,評估MSTN基因的沉默效果,并檢測RNA干擾后對下游基因的影響。方法通過構建黃河裸裂尻魚（Schizopygopsis pylzovi）MSTN基因RNA干擾（RNAi）重組腺病毒載體1P3（DSP MSTN 273+250+1737）和1P2（DSP MSTN 195+1670）,并將其注射黃河裸裂尻魚肌肉組織,進行活體RNA干擾;利用real-time PCR和Western blotting評估MSTN基因的沉默效果,并檢測MSTN基因RNA干擾后肌肉肌酸激酶（muscle-type creatine kinase,M-CK）基因轉錄水平的調控作用。結果real-time PCR分析結果表明,與HK組（病毒通用陰性對照組）和N組（空白對照組）相比,重組腺病毒載體1P3對黃河裸裂尻魚肌肉MSTN基因的轉錄具有明顯的干擾作用（P<0.05）,抑制率達53.5%;而重組腺病毒載體1P2對MSTN基因的轉錄無明顯干擾作用（P>0.05）。Western-blotting分析結果與real-tim... 

【文章來源】：中國實驗動物學報. 2016,24(04)北大核心CSCD

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 樣本采集
        1.1.2 主要儀器與試劑
    1.2 方法
        1.2.1 構建shRNA重組腺病毒載體
            (1)干擾質粒的構建
            (2)包裝腺病毒載體
        1.2.2 黃河裸裂尻魚活體注射重組腺病毒
        1.2.3 Real-time PCR檢測RNA干擾后MSTN基因表達以及對下游基因M-CK的影響
        1.2.4 Western-blotting檢測RNA干擾后MSTN基因的表達量
2 結果與分析
    2.1 腺病毒載體的構建
        2.1.1 shRNA干擾載體的構建
        2.1.2 包裝重組腺病毒
    2.2 Real-time PCR檢測黃河裸裂尻魚RNA干擾后MSTN的相對表達量
    2.3 Western-blotting測定RNA干擾對MSTN蛋白相對表達情況
    2.4 Real-time PCR檢測黃河裸裂尻魚MSTN基因RNA干擾后對下游基因M-CK的表達調控
3 討論



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