發(fā)布時(shí)間：2021-11-03 13:17

　　目的利用反義寡合甘酸技術(shù)抑制肌肉生長(zhǎng)抑制素（myostatin,MSTN）的表達(dá),評(píng)估MSTN基因的沉默效果,并檢測(cè)RNA干擾后對(duì)下游基因的影響。方法通過(guò)構(gòu)建黃河裸裂尻魚(yú)（Schizopygopsis pylzovi）MSTN基因RNA干擾（RNAi）重組腺病毒載體1P3（DSP MSTN 273+250+1737）和1P2（DSP MSTN 195+1670）,并將其注射黃河裸裂尻魚(yú)肌肉組織,進(jìn)行活體RNA干擾;利用real-time PCR和Western blotting評(píng)估MSTN基因的沉默效果,并檢測(cè)MSTN基因RNA干擾后肌肉肌酸激酶（muscle-type creatine kinase,M-CK）基因轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控作用。結(jié)果real-time PCR分析結(jié)果表明,與HK組（病毒通用陰性對(duì)照組）和N組（空白對(duì)照組）相比,重組腺病毒載體1P3對(duì)黃河裸裂尻魚(yú)肌肉MSTN基因的轉(zhuǎn)錄具有明顯的干擾作用（P<0.05）,抑制率達(dá)53.5%;而重組腺病毒載體1P2對(duì)MSTN基因的轉(zhuǎn)錄無(wú)明顯干擾作用（P>0.05）。Western-blotting分析結(jié)果與real-tim... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)報(bào). 2016,24(04)北大核心CSCD

【文章頁(yè)數(shù)】：7 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 樣本采集
        1.1.2 主要儀器與試劑
    1.2 方法
        1.2.1 構(gòu)建shRNA重組腺病毒載體
            (1)干擾質(zhì)粒的構(gòu)建
            (2)包裝腺病毒載體
        1.2.2 黃河裸裂尻魚(yú)活體注射重組腺病毒
        1.2.3 Real-time PCR檢測(cè)RNA干擾后MSTN基因表達(dá)以及對(duì)下游基因M-CK的影響
        1.2.4 Western-blotting檢測(cè)RNA干擾后MSTN基因的表達(dá)量
2 結(jié)果與分析
    2.1 腺病毒載體的構(gòu)建
        2.1.1 shRNA干擾載體的構(gòu)建
        2.1.2 包裝重組腺病毒
    2.2 Real-time PCR檢測(cè)黃河裸裂尻魚(yú)RNA干擾后MSTN的相對(duì)表達(dá)量
    2.3 Western-blotting測(cè)定RNA干擾對(duì)MSTN蛋白相對(duì)表達(dá)情況
    2.4 Real-time PCR檢測(cè)黃河裸裂尻魚(yú)MSTN基因RNA干擾后對(duì)下游基因M-CK的表達(dá)調(diào)控
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