大豆胞囊線蟲�。⊿oybean Cyst Nematode,SCN）作為一種重要病害,已經(jīng)逐漸成為各個國家地區(qū)研究的熱點。大豆胞囊線蟲病防護措施主要包括抗線劑的使用、莊稼輪作及抗性品種的培育,其中抗性植株的培育,是防治大豆胞囊線蟲病最有效、最實際的措施。所以培育高產(chǎn)抗病的大豆植株,成為提高大豆產(chǎn)量、增加農(nóng)民收入的重要舉措。本試驗篩選出在大豆胞囊線蟲3號生理小種侵染前后,抗感病品種中差異表達基因,而肌醇加氧酶基因就是其中之一,命名為MIOX。大豆基因組上,也發(fā)現(xiàn)了和擬南芥同源的肌醇加氧酶基因,命名為GmMIOX。其基因家族包括三個基因,分別命名為GmMIOX1、GmMIOX2、GmMIOX4。本試驗旨在研究在線蟲脅迫下肌醇加氧酶基因的表達分析,揭示抗性品種抗大豆胞囊線蟲病的分子機制。本研究分別在大豆胞囊線蟲侵染后的0d、5d、10d、15d、20d、25d取樣,提取RNA,反轉(zhuǎn)錄成為cDNA,利用半定量PCR技術(shù)檢測肌醇加氧酶基因在線蟲侵染前后是否存在差異。主要研究成果包括:1.利用半定量PCR技術(shù),分別檢測在抗病品種灰皮支黑豆、小粒黑豆、哈爾濱小黑豆中,GmMIOX1、GmMIOX2、... 

【文章來源】：沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：75 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 文獻綜述
    1.1 大豆胞囊線蟲病的研究進展
        1.1.1 大豆胞囊線蟲病的發(fā)現(xiàn)和危害
        1.1.2 大豆胞囊線蟲生活史
    1.2 大豆胞囊線蟲病抗性機理研究
        1.2.1 根系滲出物對大豆胞囊線蟲孵化的影響
        1.2.2 線蟲侵入后植物的組織、細胞病理學(xué)反應(yīng)
    1.3 抗大豆胞囊線蟲病基因的研究進展
    1.4 肌醇加氧酶(MIOX)研究進展
        1.4.1 肌醇加氧酶研究背景
        1.4.2 肌醇加氧酶研究現(xiàn)狀
        1.4.3 MIOX基因與植物逆境脅迫研究
    1.5 本試驗的基本思路和擬研究內(nèi)容
第二章 大豆肌醇加氧酶(GmMIOX)基因家族差異基因的篩選及定量分析
    2.1 材料與方法
        2.1.1 試驗材料
        2.1.2 試驗方法
        2.1.3 肌醇加氧酶基因相對表達量分析
    2.2 結(jié)果與分析
        2.2.1 酸性品紅染色結(jié)果鑒定
        2.2.2 大豆根總RNA的提取
        2.2.3 大豆肌醇加氧酶基因半定量結(jié)果分析
        2.2.4 GmMIOX2基因熒光定量曲線及表達量分析
        2.2.5 GmMIOX4基因熒光定量曲線及表達量分析
    2.3 本章小結(jié)
第三章 GmMIOX2和GmMIOX4基因過表達載體的構(gòu)建及表達產(chǎn)物的亞細胞定位
    3.1 材料與方法
        3.1.1 試驗材料
        3.1.2 試驗方法
    3.2 結(jié)果與分析
        3.2.1 目的基因的擴增
        3.2.2 重組質(zhì)粒pGEM-GmMIOX2和pGEM-GmMIOX4酶切鑒定
        3.2.3 重組質(zhì)粒pCAMBIA-GmMIOX2和pCAMBIA-GmMIOX4酶切鑒定
        3.2.4 GmMIOX2和GmMIOX4基因載體構(gòu)建
        3.2.5 亞細胞定位結(jié)果分析
    3.3 本章小結(jié)
第四章 肌醇加氧酶酶活力的測定
    4.1 材料與方法
        4.1.1 試驗材料
        4.1.2 試驗方法
    4.2 結(jié)果與分析
        4.2.1 肌醇加氧酶酶活性標準曲線的繪制
        4.2.2 各個樣品對應(yīng)吸光度(OD)值
        4.2.3 各樣品對應(yīng)酶活力(U/L)
        4.2.4 不同抗性品種接種大豆胞囊線蟲根內(nèi)肌醇加氧酶活性的變化
    4.3 本章小結(jié)
第五章 肌醇加氧酶基因生物信息分析
    5.1 材料與方法
        5.1.1 試驗材料
        5.1.2 試驗方法
    5.2 結(jié)果與分析
        5.2.1 GmMIOX2蛋白質(zhì)理化性質(zhì)分析
        5.2.2 GmMIOX4蛋白質(zhì)理化性質(zhì)分析
        5.2.3 GmMIOX2基因的染色體定位、基因結(jié)構(gòu)分析
        5.2.4 Gm MIOX4 基因的染色體定位、基因結(jié)構(gòu)分析
        5.2.5 GmMIOX2編碼蛋白的磷酸化位點分析
        5.2.6 GmMIOX4編碼蛋白的磷酸化位點分析
        5.2.7 GmMIOX2基因編碼蛋白與其他植物GmMIOX2蛋白的進化分析
        5.2.8 GmMIOX4基因編碼蛋白與其他植物GmMIOX4蛋白的進化分析
        5.2.9 GmMIOX2基因序列在不同抗性品種中多樣性分析
        5.2.10 GmMIOX4基因序列在不同抗性品種中多樣性分析
    5.3 本章小結(jié)
第六章 結(jié)論與討論
    6.1 結(jié)論
    6.2 討論
參考文獻
致謝
攻讀學(xué)位論文期間發(fā)表文章


【參考文獻】：
期刊論文
[1]大豆抗SCN機制及抗病相關(guān)基因研究進展[J]. 練云,盧為國.  中國油料作物學(xué)報. 2013(06)
[2]植物抗病基因結(jié)構(gòu)和功能研究進展[J]. 田遠飛,薛永來,付為國,戴志聰,杜道林.  廣東農(nóng)業(yè)科學(xué). 2012(22)
[3]不同大豆品種根系對大豆胞囊線蟲趨化性的影響[J]. 王雪,段玉璽,陳立杰,王媛媛.  大豆科學(xué). 2008(06)
[4]水稻肌醇加氧酶基因的表達分析及植物表達載體的構(gòu)建[J]. 王海光,張洪亮,段俊枝,李自超.  中國農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報. 2007(04)
[5]植物基因克隆的策略和方法[J]. 鄧洪新,余懋群.  西南農(nóng)業(yè)學(xué)報. 2001(03)

博士論文
[1]大豆胞囊線蟲種群多樣性及遺傳分化研究[D]. 王東.沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué) 2015
[2]大豆抗胞囊線蟲機制及與抗性相關(guān)的差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究[D]. 王雪.沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué) 2009



本文編號：3470566