目的體外應用慢病毒載體轉染構建TTF-1基因過表達的A549細胞系,然后實驗室培養(yǎng)測試肺腺癌A549細胞的增殖能力、遷移和侵襲能力,以明確TTF-1基因對肺腺癌細胞增殖能力、遷移和侵襲能力的影響。方法分析TTF-1基因序列,設計單鏈Oligo序列,應用PCR法將TTF-1的cDNA的Oligo序列進行拼接,然后連入pCDH-CMV-MCS-EF1-CopGFP-T2A-puro,轉化至感受態(tài)細胞DH-5α,測序鑒定;將攜帶TTF-1基因的慢病毒過表達重組載體轉染至293T細胞,包裝產生慢病毒,測定病毒滴度并應用最佳病毒滴度去感染人肺腺癌A549細胞株,構建過表達的TTF-1基因的肺腺癌細胞系,體外繼續(xù)培養(yǎng)TTF-1基因過表達的A549細胞系,應用細胞增殖實驗、細胞劃痕實驗及細胞遷移實驗了解過表達TTF-1基因對肺腺癌細胞增殖能力、遷移和侵襲能力的影響。結果測序結果顯示,TTF-1基因過表達慢病毒載體pCDH-CMV-MCS-EF1-CopGFP-T2A-puro構建成功,基因序列測序結果正確;經慢病毒包裝所得病毒上清液經計算病毒滴度為6×10⁷TU/ml;穩(wěn)定轉染... 

【文章來源】：寧夏醫(yī)科大學寧夏回族自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：52 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
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前言
材料
方法
結果
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結論
參考文獻
文獻綜述
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致謝
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期刊論文
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本文編號：3459932