檢測(cè)和分析核糖核酸還原酶大亞基（RNR-LC）基因、小亞基（RNR-M2）基因在不同蛹蟲草菌株中m RNA的相對(duì)表達(dá)量與蟲草素含量的變化關(guān)系,探究核糖核酸還原酶在蟲草素合成途徑中的轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用。檢測(cè)不同蛹蟲草菌株蟲草素含量,采用熒光PCR技術(shù)對(duì)蛹蟲草RNR-LC基因、RNR-M2基因表達(dá)的m RNA進(jìn)行定量分析,并應(yīng)用雙內(nèi)參基因?qū)υ囼?yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行校正。以蟲草素含量最低的野生蛹蟲草組為對(duì)照,米基蟲草組RNR-LC、RNR-M2基因的m RNA表達(dá)量分別是野生蛹蟲草組的1.28倍和1.47倍,蠶蛹蟲草組分別是其2.35倍和3.84倍。與對(duì)照組相比,RNR-M2 mRNA表達(dá)隨蟲草素的增加總體呈現(xiàn)升高的變化規(guī)律。兩種基因在不同蛹蟲草菌株中的相對(duì)表達(dá)量存在顯著性差異（p<0.05）。RNR-M2基因在高蟲草素菌株中存在明顯的表達(dá)優(yōu)勢(shì),而RNR-LC基因表達(dá)量與蟲草素含量無(wú)明顯變化關(guān)系,二者不存在協(xié)同調(diào)控作用。推測(cè)RNR-M2基因在蟲草素合成途徑中起著重要的正向調(diào)控作用。 

【文章來(lái)源】：現(xiàn)代食品科技. 2020,36(09)北大核心

【文章頁(yè)數(shù)】：6 頁(yè)

【部分圖文】：

蟲草素高效液相色譜圖

樣本分為3組不同來(lái)源蛹蟲草菌株，每組樣本設(shè)置3個(gè)平行，每個(gè)樣品設(shè)置3個(gè)重復(fù)。以各樣品的RNR-M2基因?qū)NR-LC基因進(jìn)行歸一化處理，比較各樣品之間二者m RNA的相對(duì)表達(dá)量差異。不同內(nèi)參基因標(biāo)準(zhǔn)化m RNA的相對(duì)表達(dá)量見(jiàn)圖2。結(jié)果表明，β-Actin與18S r RNA單獨(dú)作為內(nèi)參基因計(jì)算RNR-M2基因相對(duì)RNR-LC基因m RNA的相對(duì)表達(dá)量總體趨勢(shì)較一致，但有極值出現(xiàn)，如β-Actin組在YY1處出現(xiàn)極大值，M1處出現(xiàn)極小值；18S r RNA組在M1處出現(xiàn)極大值，YY1處出現(xiàn)極小值。β-Actin和18S r RNA同時(shí)作為內(nèi)參基因，計(jì)算結(jié)果與單內(nèi)參基因基本一致，但相對(duì)表達(dá)量介于二者之間。2.2.2 檢測(cè)結(jié)果變異程度比較

變異系數(shù)（coefficient of variation,CV）是用來(lái)描述不同測(cè)量值均數(shù)相差較大時(shí)的離散程度，統(tǒng)計(jì)學(xué)中用SD與?x之比表示。計(jì)算β-Actin、18S r RNA雙內(nèi)參基因和單內(nèi)參基因時(shí)不同蛹蟲草樣品RNR-M2基因相對(duì)RNR-LC基因表達(dá)量的變異系數(shù)，結(jié)果見(jiàn)圖3。結(jié)果顯示，雙內(nèi)參基因計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)化m RNA相對(duì)表達(dá)量在大多數(shù)樣品中變異系數(shù)較小，且未出現(xiàn)極值；而單內(nèi)參基因計(jì)算，樣品TY2、M5、J3離散程度較大，結(jié)果不可靠。2.2.3 雙內(nèi)參基因2-ΔΔCt法檢測(cè)目的基因相對(duì)表達(dá)量

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]蟲草素的藥理作用及其應(yīng)用前景[J]. 孫恩江,劉琪,黃志毅,孫鳳剛.  廣東飼料. 2018(05)
[2]野生與人工栽培蛹蟲草主要成分對(duì)比分析[J]. 康麗娜.  新農(nóng)業(yè). 2013(03)

碩士論文
[1]蟲草素生物合成相關(guān)基因RNR的克隆及功能驗(yàn)證研究[D]. 王玉賢.成都中醫(yī)藥大學(xué) 2018



本文編號(hào)：3457523