慢型骨骼肌肌鈣蛋白基因主要包括肌鈣蛋白C 1基因（Troponin C type 1,TNNC1）、肌鈣蛋白I 1基因（Troponin I type 1,TNNI1）和肌鈣蛋白T 1基因（Troponin T type 1,TNNT1）,它們對(duì)骨骼肌的收縮、骨骼肌肌肉纖維特性及多種疾病的發(fā)生有密切關(guān)系。目前,有關(guān)綿羊的TNNC1、TNNI1和TNNT1基因的全長(zhǎng)核酸序列未見(jiàn)報(bào)道。本試驗(yàn)采用RT-PCR、RACE、生物信息學(xué)分析、熒光定量PCR等技術(shù)方法,克隆了小尾寒羊TNNC1、TNNI1和TNNT1基因的全長(zhǎng)序列,預(yù)測(cè)分析了其對(duì)應(yīng)蛋白的序列和特性,構(gòu)建了其在小尾寒羊和杜泊羊多種組織的表達(dá)譜,從分子水平上探索了小尾寒羊三個(gè)基因的主要結(jié)構(gòu)和表達(dá)特性。主要結(jié)果如下:（1）克隆測(cè)序得到了小尾寒羊TNNC1、TNNI1和TNNT1基因的cDNA序列,其中TNNI1包含兩個(gè)5′端有區(qū)別的序列,并分別命名為T(mén)NNI1a和TNNI1b。得到的TNNC1、TNNI1a和TNNT1基因的全長(zhǎng)cDNA序列及TNNI1b基因的部分cDNA序列已提交至GenBank,并分別獲得登錄號(hào)為KR153938、KT... 

【文章來(lái)源】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)山東省

【文章頁(yè)數(shù)】：85 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

TNNC1保守區(qū)、3′端及5′端片段電泳圖

圖 3-2 TNNC1 全長(zhǎng) cDNA 核苷酸和氨基酸對(duì)應(yīng)圖Fig.3-2 TNNC1 cDNA nucleotide sequence and the corresponding amino acid sequence3.1.2 TNNI1 基因克隆結(jié)果及序列特征3.1.2.1 TNNI1 基因克隆結(jié)果保守區(qū)片段經(jīng)過(guò)普通 PCR 反應(yīng)獲得長(zhǎng)度為 515 bp 和 523 bp 的序列片段。根據(jù)獲得的中間片段序列獲得的引物，3′ RACE 和 5′ RACE 結(jié)果符合試驗(yàn)預(yù)計(jì)片段，經(jīng)測(cè)序，得到基因 TNNI1 的 cDNA 的 3′ 和 5′ 端片段，且長(zhǎng)度分別為 429 bp 和 157 bp。試驗(yàn)結(jié)果均通過(guò) GenBank 數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)驗(yàn)證。最后，通過(guò) ContigExpress 序列拼接軟件進(jìn)行準(zhǔn)確的序列拼接，獲得基因全長(zhǎng)序列。對(duì)于保守區(qū)處的兩個(gè)不同的片段，經(jīng)驗(yàn)證為基因亞型。TNNI1 三個(gè)片段的凝膠電泳結(jié)果如圖 3-3 所示。

圖 3-2 TNNC1 全長(zhǎng) cDNA 核苷酸和氨基酸對(duì)應(yīng)圖Fig.3-2 TNNC1 cDNA nucleotide sequence and the corresponding amino acid sequence3.1.2 TNNI1 基因克隆結(jié)果及序列特征3.1.2.1 TNNI1 基因克隆結(jié)果保守區(qū)片段經(jīng)過(guò)普通 PCR 反應(yīng)獲得長(zhǎng)度為 515 bp 和 523 bp 的序列片段。根據(jù)獲得的中間片段序列獲得的引物，3′ RACE 和 5′ RACE 結(jié)果符合試驗(yàn)預(yù)計(jì)片段，經(jīng)測(cè)序，得到基因 TNNI1 的 cDNA 的 3′ 和 5′ 端片段，且長(zhǎng)度分別為 429 bp 和 157 bp。試驗(yàn)結(jié)果均通過(guò) GenBank 數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)驗(yàn)證。最后，通過(guò) ContigExpress 序列拼接軟件進(jìn)行準(zhǔn)確的序列拼接，獲得基因全長(zhǎng)序列。對(duì)于保守區(qū)處的兩個(gè)不同的片段，經(jīng)驗(yàn)證為基因亞型。TNNI1 三個(gè)片段的凝膠電泳結(jié)果如圖 3-3 所示。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]慢性腎臟病患者腺苷負(fù)荷心肌灌注顯像及肌鈣蛋白水平的臨床分析[J]. 謝瑜,羅惠民,江勇,余亞琳,周曉萍.  昆明醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2015(06)
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[3]杜泊羊的適應(yīng)性生長(zhǎng)規(guī)律觀察報(bào)告[J]. 烏蘭其其格,鈕河.  畜牧與飼料科學(xué). 2011(11)
[4]多種心肌損傷標(biāo)志物聯(lián)合檢測(cè)在急性心肌梗死診斷中的應(yīng)用價(jià)值分析[J]. 賀贊靜.  中國(guó)醫(yī)學(xué)創(chuàng)新. 2011(19)
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[6]心肌酶譜和肌鈣蛋白I聯(lián)合檢測(cè)對(duì)診斷急性心肌梗死的臨床應(yīng)用價(jià)值[J]. 梁偉,易偉蓮.  中國(guó)當(dāng)代醫(yī)藥. 2010(12)
[7]小尾寒羊不同部位羊肉理化特性及肉用品質(zhì)的比較[J]. 郭元,李博.  食品科學(xué). 2008(10)
[8]杜泊肉綿羊良種培育及優(yōu)良特性[J]. 曹斌云,趙敬賢,張若楠.  畜牧獸醫(yī)雜志. 2004(01)
[9]小尾寒羊的品種特點(diǎn)及利用途徑[J]. 杜建中.  草與畜雜志. 1990(02)

碩士論文
[1]杜泊羊種質(zhì)特性初步研究[D]. 王建剛.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2006



本文編號(hào)：3444473