脂肪酸去飽和酶2基因（FAD2）是控制油菜中油酸含量的重要基因,通過研究GATA和GT轉(zhuǎn)錄因子與BnaFAD2.A5和BnaFAD2.C5啟動子的互作關(guān)系及其轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制,為高油酸油菜育種提供分子理論基礎(chǔ)。本研究通過缺失啟動子片段及生物信息學(xué)分析,預(yù)測BnaFAD2.A5和BnaFAD2.C5啟動子區(qū)潛在順式作用元件;從PlantTFDB轉(zhuǎn)錄因子數(shù)據(jù)庫中篩選候選轉(zhuǎn)錄因子,通過實(shí)時熒光定量PCR（RT-qPCR）檢測轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)規(guī)律,并與BnaFAD2.A5和BnaFAD2.C5表達(dá)規(guī)律對比,進(jìn)一步篩選候選轉(zhuǎn)錄因子;利用酵母單雜交驗(yàn)證轉(zhuǎn)錄因子與啟動子序列的互作情況;將轉(zhuǎn)錄因子與BnaFAD2.A5和BnaFAD2.C5啟動子序列共轉(zhuǎn)入擬南芥,通過Western blot檢測報告基因GFP的蛋白表達(dá)情況,分析轉(zhuǎn)錄因子對于啟動子功能的影響。主要研究結(jié)果如下:（1）BnaFAD2.C5啟動子-1020^-319bp區(qū)域主要啟動基因在甘藍(lán)型油菜根部表達(dá);-1020^-581bp區(qū)域主要控制基因在莖組織中表達(dá);-581^-319bp區(qū)域... 

【文章來源】：湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)湖南省

【文章頁數(shù)】：101 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

油酸合成路徑示意圖

技術(shù)路線圖

16圖2-1BnaFAD2.C5啟動子在轉(zhuǎn)基因擬南芥中進(jìn)行分析。Fig.2-1TheBnaFAD2.C5promoteranalysesintransgenicArabidopsis.圖A：包含不同激素應(yīng)答元件的缺失啟動子片段的模型圖；圖B：GUS組織化學(xué)分析結(jié)果；圖C：包含不同啟動子片段的轉(zhuǎn)基因擬南芥種子中GFP表達(dá)量分析結(jié)果；圖D：包含不同啟動子片段的轉(zhuǎn)基因擬南芥的根、莖、葉、花中GFP的定量表達(dá)分析。這些值是平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤差。A:Modelmapofadeletionpromoterfragmentcontainingdifferenthormoneresponseelements;B:ResultsofGUShistochemicalanalysis;C:ResultsofGFPexpressionanalysisintransgenicArabidopsisseedscontainingdifferentpromoterfragments;D:QuantitativeexpressionanalysisofGFPinroots,stems,leaves,flowersoftransgenicArabidopsiscontainingdifferentpromoterfragments.Thesevaluesaremean±standarderror.

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]文冠果LEC1基因的克隆及表達(dá)分析[J]. 路蒙蒙,韓碩,楊琦,王俊秀,郭惠紅.  北京林業(yè)大學(xué)學(xué)報. 2018(01)
[2]鹽穗木鹽相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子HcSCL13基因啟動子的克隆及活性初步分析[J]. 樊壽德,王艷.  生物技術(shù)通報. 2017(05)
[3]甘藍(lán)型油菜BnFAD2基因的克隆、表達(dá)及功能分析[J]. 劉睿洋,劉芳,官春云.  作物學(xué)報. 2016(07)
[4]白菜型油菜PDAT1基因的克隆及生物信息學(xué)分析[J]. 穆姣,趙翠珠,王莉莉,李卓蔚,李歡,劉明喆,李長圣,楊錚,張猛.  西北農(nóng)業(yè)學(xué)報. 2015(12)
[5]棉花G.LEC1A基因的克隆和鑒定[J]. 樊可心,曹愛萍,張文婷,郝小軍,崔百明.  石河子大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版). 2015(05)
[6]玉米DGAT基因家族的全基因組分析[J]. 李書霞,劉偉,李威,祝水金,吳殿星,陳進(jìn)紅.  核農(nóng)學(xué)報. 2015(04)
[7]轉(zhuǎn)錄因子WRI1在主要作物中的研究進(jìn)展[J]. 丁霄,楊淑巧,許琦,杜春芳,吳慎杰,羅曉麗,馬燕斌,張安紅,孫璇,李朋波.  分子植物育種. 2015(03)
[8]甘藍(lán)型油菜Δ9硬脂酰ACP脫氫酶（SAD）基因的克隆與表達(dá)分析[J]. 賈艷麗,吳磊,盧長明.  中國油料作物學(xué)報. 2014(02)
[9]三個花生溶血磷脂酸�；D(zhuǎn)移酶基因的克隆與序列分析[J]. 董芳,遲曉元,楊慶利,陳娜,潘麗娟,陳明娜,和亞男,楊珍,王通,王冕,禹山林.  花生學(xué)報. 2013(01)
[10]轉(zhuǎn)錄因子在調(diào)控種子油脂生物合成及增加植物儲脂含量中的重要作用(英文)[J]. 沈奇,韓宏仕,秦信蓉,向陽,王仙萍,趙躍,趙云,喻時周,杜才富.  Agricultural Science & Technology. 2013(01)

博士論文
[1]多年多點(diǎn)條件下大豆脂肪酸含量QTL分析[D]. 苗興芬.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2010
[2]水稻全長cDNA序列的比較分析、相關(guān)數(shù)據(jù)庫的構(gòu)建植物與動物trihelix轉(zhuǎn)錄因子基因家族的比較研究[D]. 陸婷婷.上海交通大學(xué) 2009
[3]麻瘋樹的抗冷性和SAD基因的克隆及表達(dá)研究[D]. 羅通.四川大學(xué) 2006

碩士論文
[1]甘藍(lán)型油菜BnFAD2-C5基因的表達(dá)及調(diào)控序列的功能分析[D]. 劉芳.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2015
[2]大豆再生相關(guān)基因GmLEC1的克隆及其功能初步分析[D]. 王敏.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2015
[3]鵝GATA-4l-6基因克隆、表達(dá)規(guī)律及在過表達(dá)GATA-4在顆粒細(xì)胞中功能研究[D]. 袁鑫.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014
[4]南極絲瓜蘚GATA轉(zhuǎn)錄因子PnGATA1的功能研究[D]. 劇建芳.山東大學(xué) 2014
[5]利用DGAT1、SLC、FAD2和FAD3基因改良擬南芥和甘藍(lán)型油菜的含油量和脂肪酸不飽和性[D]. 倪雪峰.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2014
[6]甘藍(lán)型油菜SNP遺傳連鎖圖譜的構(gòu)建及品質(zhì)性狀QTL定位[D]. 毛龍.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013
[7]花生油脂合成關(guān)鍵酶基因DGAT3、SAD的分子特征分析與FAD2的轉(zhuǎn)化研究[D]. 東金玉.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
[8]LEC基因促進(jìn)植物體細(xì)胞胚形成及機(jī)理的研究[D]. 郭鳳丹.山東師范大學(xué) 2012
[9]甘藍(lán)型油菜高油酸性狀的遺傳研究及近紅外檢測模型的建立[D]. 尚國霞.西南大學(xué) 2010
[10]AtGT-3b轉(zhuǎn)錄因子與CMO、BADH基因啟動子相互作用分析[D]. 關(guān)秋玲.遼寧師范大學(xué) 2009



本文編號：3443764