百脈根（Lotus corniculatus）,豆科百脈根屬,多年生草本植物。發(fā)源地為亞歐大陸溫帶地區(qū),現(xiàn)世界各地及我國均有分布。百脈根莖葉細多,適口性好,具有較高的飼用價值;其最大特點為莖葉富含縮合單寧,作為飼草能夠有效降低家畜臌脹病的發(fā)生。本研究收集來源于世界各地的235份百脈根種子建立種質(zhì)資源圃,重點對葉片中的縮合單寧含量進行定性定量測定,分析縮合單寧含量與13個農(nóng)藝性狀之間的相關(guān)性,并利用農(nóng)桿菌侵染擬南芥花序的轉(zhuǎn)化方法將縮合單寧生物合成過程中的關(guān)鍵酶基因ANR（花青素還原酶）轉(zhuǎn)入擬南芥中,對T₃代轉(zhuǎn)基因擬南芥植株中的縮合單寧含量進行測定,以期為抗臌脹病百脈根品種的選育奠定基礎(chǔ)�，F(xiàn)主要研究結(jié)果如下:1.235份百脈根種質(zhì)葉片中縮合單寧含量的變化范圍為5¹6 g/Kg干物質(zhì)（DM）,將其劃分為3個等級:縮合單寧含量較低的種質(zhì)41份（5⁷ g/kg DM）,中等的種質(zhì)122份（7.1⁹.5 g/kg DM）和較高種質(zhì)72份（9.6¹6 g/kg DM）。2.對百脈根種質(zhì)資源圃... 

【文章來源】：蘭州大學(xué)甘肅省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：60 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

縮合單寧（原花青素）生物合成途徑是由三個連續(xù)的代謝途徑構(gòu)成的一個復(fù)合途徑共同完成的

蘭州大學(xué)碩士學(xué)位論文 百脈根種質(zhì)資源縮合單寧評價及關(guān)鍵基因的挖掘殺青處理 15 分鐘后，80℃烘干 24 h 并磨碎過 1 mm 篩孔，備用。2.1.3.2 測定方法準確稱取 0.2±0.001 g 樣品置于 10 mL 離心管中，加入 10 mL 甲醇，于搖床中震蕩 20 min，3000 rpm/min、20 min 離心。取上清液 1 mL，加入 5 mL 顯色劑，搖勻后避光置于水浴鍋中，30±1℃恒溫水浴 30 min，漩渦震蕩后，在 550nm 波長下測定吸光度，每個樣品重復(fù)三次，最終取平均值，記錄數(shù)據(jù)并依據(jù)標準曲線計算百脈根葉片中原花青素含量（李春陽等, 2004）。2.1.3.3 標準曲線

圖 2-2 百脈根種質(zhì)資源葉片中縮合單寧定性檢測結(jié)果.2 百脈根中縮合單寧的含量及其分級通過香草醛-鹽酸法對 235 份百脈根葉片中的縮合單寧含量進行定量測定表明：235 份百脈根材料葉片中的縮合單寧含量在 5~16 g/kg DM 范圍內(nèi)動。結(jié)合定性測定結(jié)果發(fā)現(xiàn)，染色前后無顯著變化的百脈根種質(zhì)縮合單寧遍位于 5~7 g/kg DM 范圍內(nèi)，而染色前后變化較為顯著的百脈根種質(zhì)縮合量在 9~16 g/kg DM 范圍內(nèi)變動，因而依據(jù)縮合單寧定量測定結(jié)果并結(jié)合定結(jié)果對百脈根進行種質(zhì)分組，初步劃分為三個等級：葉片中縮合單寧含的百脈根種質(zhì) 41 份，縮合單寧含量范圍為 5~7 g/kg DM（圖 A），主要國、格魯吉亞和阿塞拜疆等亞洲國家的大部分種質(zhì)；縮合單寧含量中等的122 份，其含量范圍為 7.1~9.5 g/kg DM（圖 B），主要包括南美洲巴西與智質(zhì)以及東歐拉脫維亞、立陶宛、摩爾多瓦等國家的種質(zhì)；縮合單寧含量較種質(zhì) 72 份，含量范圍為 9.6~16 g/kg DM（圖 C），主要包括澳大利亞的美國、德國、意大利和南斯拉夫大部分種質(zhì)。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]縮合單寧對肉牛過瘤胃蛋白特性的影響[J]. 袁英良,唐丹,賴憲明,魯英,李成云,張英輝,閆衛(wèi)紅.  中國飼料. 2018(23)
[2]苗藥艾納香花青素還原酶基因的克隆及其生物信息學(xué)分析[J]. 鞠志剛,蔣夢星,王文斌,繆艷燕,楊芳芳,陳曉蘭.  分子植物育種. 2018(22)
[3]73份俄羅斯百脈根的營養(yǎng)價值和相對飼喂價值的評價[J]. 張本瑜,師尚禮.  草原與草坪. 2017(01)
[4]百脈根對干旱脅迫的生長、生理生態(tài)響應(yīng)及其抗旱性評價[J]. 陳超,趙麗麗,王普昶,任登鴻,戴全厚.  水土保持學(xué)報. 2014(03)
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[6]刺梨兩個縮合單寧合成基因的克隆與分析[J]. 楊曼,安華明,何任丹.  貴州農(nóng)業(yè)科學(xué). 2012(08)
[7]百脈根ISSR-PCR反應(yīng)體系的建立與優(yōu)化[J]. 富新年,師尚禮,王贊,李俊,閆洪唯.  草原與草坪. 2012(03)
[8]百脈根種質(zhì)苗期抗旱性鑒定及綜合評價[J]. 趙海明,孫桂枝,王學(xué)敏,劉貴波.  草原與草坪. 2011(06)
[9]核桃青皮中單寧的類型及含量測定[J]. 王全杰,李超,王純,張家樹,王燕杰,王延青.  皮革與化工. 2011(03)
[10]縮合單寧功能性研究探討[J]. 王俊宏,鄭向麗,徐國忠.  熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué). 2011(01)

博士論文
[1]百脈根種質(zhì)評價、創(chuàng)制與LcSRA13耐鹽調(diào)控機理研究[D]. 王丹.蘭州大學(xué) 2018

碩士論文
[1]百脈根早熟品系農(nóng)藝性狀及組培再生體系研究[D]. 閆向忠.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué) 2007



本文編號：3434854