硫代葡萄糖苷是十字花科植物中一種典型的防御代謝產(chǎn)物。黑油筒小白菜對害蟲取食表現(xiàn)出高抗性,為了研究其抗蟲機(jī)理,本實(shí)驗(yàn)檢測了黑油筒葉片不同生長時(shí)期和不同葉位的硫苷含量,討論了小白菜中硫苷分布的生理和生態(tài)意義;利用甜菜夜蛾與黑油筒小白菜含有的硫苷之間的相互作用,探究了黑油筒的抗蟲機(jī)理,并對響應(yīng)甜菜夜蛾取食變化劇烈的Bra008132基因,進(jìn)行了基因及其啟動(dòng)子分析以及相關(guān)載體的構(gòu)建。主要研究結(jié)果如下:（1）黑油筒小白菜不同葉期葉片中的硫苷含量變化較大,由四葉期到八葉期硫苷含量增加,十二葉期硫苷含量下降。其中,脂肪族硫苷含量隨著葉期的生長呈現(xiàn)下降趨勢,在十二葉期時(shí)硫苷含量達(dá)到最低。吲哚族和芳香族硫苷含量的變化趨勢與總硫苷的變化趨勢一致,皆在八葉期時(shí)硫苷含量最高,四葉期和十二葉期含量較低。對八葉期不同葉位中硫苷含量的檢測發(fā)現(xiàn),幼葉相對于老葉,硫苷含量較高。（2）對甜菜夜蛾取食后黑油筒小白菜中的硫苷含量變化檢測發(fā)現(xiàn),隨著取食時(shí)間的延長硫苷含量呈上升的趨勢,且吲哚族硫苷比脂肪族硫苷的上升趨勢更為明顯。對甜菜夜蛾體內(nèi)谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶活性的檢測發(fā)現(xiàn),其活性隨取食時(shí)間的延長顯著提高。對硫苷相關(guān)基因的定量分析,... 

【文章來源】：浙江農(nóng)林大學(xué)浙江省

【文章頁數(shù)】：59 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略詞
1 文獻(xiàn)綜述
    1.1 硫代葡萄糖苷
        1.1.1 硫代葡萄糖苷的結(jié)構(gòu)與分類
        1.1.2 硫代葡萄糖苷的合成
            1.1.2.1 氨基酸側(cè)鏈的延伸
            1.1.2.2 核心結(jié)構(gòu)的形成
            1.1.2.3 側(cè)鏈的次級修飾
        1.1.3 硫代葡萄糖苷的轉(zhuǎn)運(yùn)
        1.1.4 硫代葡萄糖苷的降解
        1.1.5 硫代葡萄糖苷的生物學(xué)功能
            1.1.5.1 參與植物防御反應(yīng)
            1.1.5.2 賦予不同風(fēng)味
            1.1.5.3 抗?fàn)I養(yǎng)作用
            1.1.5.4 抗癌
    1.2 SOT蛋白研究進(jìn)展
    1.3 甜菜夜蛾的分布及其危害
    1.4 本研究的目的與意義
2 黑油筒不同葉期以及不同葉位硫苷含量
    2.1 材料與方法
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.2 儀器與試劑
        2.1.3 黑油筒生長條件
        2.1.4 取樣
        2.1.5 硫苷的提取及HPLC檢測
    2.2 結(jié)果
        2.2.1 不同葉期硫苷含量
        2.2.2 八葉期黑油筒不同葉位硫苷含量
    2.3 討論
3 甜菜夜蛾與黑油筒硫苷的相互影響
    3.1 材料與方法
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.2 儀器與試劑
        3.1.3 黑油筒生長條件
        3.1.4 接蟲方法
        3.1.5 取樣
        3.1.6 硫苷的提取及HPLC檢測
        3.1.7 RNA的提取及反轉(zhuǎn)錄
        3.1.8 谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶
        3.1.9 硫苷相關(guān)基因的定量分析
            3.1.9.1 總RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA
            3.1.9.2 硫苷相關(guān)基因的定量分析
    3.2 結(jié)果
        3.2.1 甜菜夜蛾取食對硫苷含量的影響
        3.2.2 硫苷相關(guān)基因的定量分析
        3.2.3 谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶的活性變化
    3.3 討論
4 小白菜基因Bra008132的克隆與表達(dá)分析
    4.1 材料與方法
        4.1.1 植物材料
        4.1.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑
        4.1.3 基因組DNA的提取
        4.1.4 植物總RNA的提取
        4.1.5 小白菜Bra008132基因序列的擴(kuò)增
        4.1.6 相關(guān)核苷酸和氨基酸序列分析
        4.1.7 qRT-PCR分析白菜Bra008132的表達(dá)
        4.1.8 啟動(dòng)子-GUS報(bào)告系統(tǒng)分析白菜Bra008132的表達(dá)
            4.1.8.1 啟動(dòng)子片段的克隆
            4.1.8.2 啟動(dòng)子順式調(diào)控元件分析
            4.1.8.3 啟動(dòng)子-GUS融合表達(dá)載體的構(gòu)建
            4.1.8.4 啟動(dòng)子-GUS融合表達(dá)載體轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌
            4.1.8.5 農(nóng)桿菌介導(dǎo)啟動(dòng)子-GUS融合表達(dá)載體轉(zhuǎn)化擬南芥
            4.1.8.6 轉(zhuǎn)基因擬南芥的篩選
        4.1.9 亞細(xì)胞定位載體的構(gòu)建
    4.2 結(jié)果
        4.2.1 小白菜Bra008132基因及其啟動(dòng)子的克隆與相關(guān)分析
        4.2.2 Bra008132基因在黑油筒小白菜中的時(shí)空表達(dá)模式
        4.2.3 啟動(dòng)子載體構(gòu)建
    4.3 討論
全文結(jié)論
附表
參考文獻(xiàn)
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[7]甘藍(lán)型油菜營養(yǎng)和生殖器官硫甙總含量的動(dòng)態(tài)研究[J]. 趙豎義,張冬青.  浙江農(nóng)業(yè)科學(xué). 1990(06)



本文編號：3423615