70-kDa熱休克蛋白是熱休克蛋白家族中的重要成員之一,它包括組成型（Heat shock cognate protein 70,Hsc70）和誘導(dǎo)型（inducible heat shock protein 70,Hsp70）兩類。它們可以發(fā)揮“分子伴侶”作用,幫助細胞抵御外界脅迫。通常情況下,組成型Hsc70主要發(fā)揮看家功能。在某些宿主體內(nèi),Hsc70同樣可以被多種刺激因子誘導(dǎo)表達,而Hsc70的表達受到轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控,但是,調(diào)控Hsc70基因表達的轉(zhuǎn)錄因子還不清楚,急需闡明。本研究旨在篩選鑒定參與近江牡蠣（Crassostrea hongkongensis）ChHsc70基因表達調(diào)控的轉(zhuǎn)錄因子,并研究ChHsc70及其轉(zhuǎn)錄因子基因?qū)峒ぁ⑽廴疚锏谋磉_模式。首先通過DNA親和純化技術(shù)篩選出能夠與ChHsc70啟動子區(qū)特異性結(jié)合的蛋白因子,用質(zhì)譜技術(shù)鑒定出其中一種蛋白為Y-box基元結(jié)合蛋白（Ch YB-1）。通過cDNA克隆技術(shù)獲得了ChYB-1基因的全長cDNA為1257 bp,其中編碼區(qū)924 bp,5’端和3’端非編碼區(qū)分別為107 bp和226 bp。分子模擬結(jié)果顯示ChYB... 

【文章來源】：暨南大學(xué)廣東省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：109 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

不同熱休克因子發(fā)揮功能的模型圖

anogastery)Yps；Y-box binding protein的分子結(jié)構(gòu) 主要包括三個結(jié)構(gòu)域：N-端富含丙氨酸或脯氨酸結(jié)構(gòu)域（A/P 結(jié)構(gòu)域）、D）及 C-端富含正電荷和負電荷氨基酸殘基交替簇結(jié)構(gòu)域（CTD），具體CSD 結(jié)構(gòu)域的結(jié)構(gòu)與細菌冷休克蛋白高度相似，該區(qū)域由五個反向平行，在第二個 β-折疊的保守序列 K/N-G-F/Y-G-F-I/V 和第三個 β-折疊中的保 為核酸結(jié)合位點，可以與 DNA/RNA 特異性結(jié)合[83]。分析 A/P 結(jié)構(gòu)域及二級結(jié)構(gòu)的特點，YB-1 的這兩個區(qū)域的二級結(jié)構(gòu)沒有保守的規(guī)律，是一76]。但是 CTD 結(jié)構(gòu)域有 poly（Pro）II 結(jié)構(gòu)，YB-1 可通過這個特殊結(jié)構(gòu)的相互作用，另外，CTD 這種特殊的無序結(jié)構(gòu)及正電荷與負電荷交替排于 YB-1 與核酸分子相互結(jié)合[76]。

白的電泳檢測 親和純化分離得到了能夠與 ChHsc70 啟動子區(qū)特異性結(jié)合的純化得到的蛋白質(zhì)通過 SDS-PAGE 凝膠電泳進行檢測，實驗結(jié)泳圖從左到右依次表示用 200 mM 和 1 M 洗脫液洗脫得到的對Cl2處理實驗組得到的 DNA-核總蛋白洗脫液。經(jīng)不同濃度洗脫組與實驗組及不同實驗組之間表現(xiàn)出明顯差異。在眾多差異條小為 40 kDa 左右的蛋白條帶引起我們的興趣，如圖中箭頭所示3。M3 蛋白條帶只出現(xiàn)在用 CdCl2污染物處理的實驗組中，在的對應(yīng)位置中并未發(fā)現(xiàn)該蛋白。結(jié)果表明，當(dāng)近江牡蠣受不同刺蛋白質(zhì)與 ChHsc70 啟動子區(qū)結(jié)合。

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本文編號：3418192