目的構(gòu)建前列腺癌細(xì)胞TNFAIP8基因過表達(dá)與沉默模型,觀察TNFAIP8基因高表達(dá)對前列腺癌細(xì)胞PC3、LNCaP的增殖促進(jìn)作用及其可能機制。方法選用正常前列腺上皮細(xì)胞RWPE1、前列腺癌細(xì)胞PC3、LNCaP為實驗對象,MTT實驗觀察細(xì)胞的增殖能力,ELISA試劑盒檢測細(xì)胞的葡萄糖消耗及ATP產(chǎn)生,qPCR及Western Blotting檢測TNFAIP8基因的mRNA和蛋白表達(dá)情況。使用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染技術(shù)構(gòu)建TNFAIP8基因過表達(dá)與沉默模型,分為空載體轉(zhuǎn)染組與TNFAIP8基因過表達(dá)組、對照組與TNFAIP8基因沉默組,觀察細(xì)胞增殖,檢測葡萄糖消耗及ATP產(chǎn)生,Seahorse XFp生物能量分析儀檢測細(xì)胞線粒體呼吸功能的變化,qPCR及Western Blotting檢測與葡萄糖代謝有關(guān)酶HK1、Glut1、G6PD、AMPK、LDHA的變化。結(jié)果（1）與前列腺上皮細(xì)胞RWPE1相比,前列腺癌細(xì)胞PC3、LNCaP的增殖能力更強,PC3細(xì)胞葡萄糖消耗、LNCaP細(xì)胞ATP產(chǎn)生能力更強。PC3及LNCaP細(xì)胞內(nèi)源性TNFAIP8基因mRNA表達(dá)均較低,LNCaP細(xì)胞內(nèi)源性TNFA... 

【文章來源】：寧夏醫(yī)科大學(xué)寧夏回族自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

不同細(xì)胞增殖能力差異與RWPE1細(xì)胞相比，***p<0.001

寧夏醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文結(jié)果14圖2A細(xì)胞葡萄糖消耗能力差異與RWPE1相比，**p<0.01，nsp>0.05。圖2B.細(xì)胞ATP產(chǎn)生能力差異與RWPE1相比，***p<0.001，nsp>0.05。1.3內(nèi)源性TNFAIP8基因表達(dá)差異使用qPCR檢測，與正常前列腺上皮細(xì)胞RWPE1相比，前列腺癌細(xì)胞PC3、LNCaP內(nèi)源性TNFAIP8的mRNA表達(dá)低（p值均<0.001），見圖3A。WB檢測所示三種細(xì)胞系內(nèi)源性TNFAIP8蛋白表達(dá)條帶和內(nèi)參β-Tubulin條帶，前列腺癌細(xì)胞LNCaP的TNFAIP8蛋白表達(dá)條帶相對偏低，見圖3Ba；計算TNFAIP8蛋白條帶相對灰度值，與正常前列腺上

寧夏醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文結(jié)果14圖2A細(xì)胞葡萄糖消耗能力差異與RWPE1相比，**p<0.01，nsp>0.05。圖2B.細(xì)胞ATP產(chǎn)生能力差異與RWPE1相比，***p<0.001，nsp>0.05。1.3內(nèi)源性TNFAIP8基因表達(dá)差異使用qPCR檢測，與正常前列腺上皮細(xì)胞RWPE1相比，前列腺癌細(xì)胞PC3、LNCaP內(nèi)源性TNFAIP8的mRNA表達(dá)低（p值均<0.001），見圖3A。WB檢測所示三種細(xì)胞系內(nèi)源性TNFAIP8蛋白表達(dá)條帶和內(nèi)參β-Tubulin條帶，前列腺癌細(xì)胞LNCaP的TNFAIP8蛋白表達(dá)條帶相對偏低，見圖3Ba；計算TNFAIP8蛋白條帶相對灰度值，與正常前列腺上


本文編號：3408162