抗腫瘤一直是生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的研究熱點(diǎn),藥物和siRNA是目前廣泛關(guān)注的抗癌治療劑,其中siRNA的優(yōu)勢在于它可以避免藥物在治療過程中產(chǎn)生的毒性影響,并且對耐藥性腫瘤的治療效果要優(yōu)于藥物。本論文旨在以Bcl-2 siRNA為治療劑、介孔聚合物納米球?yàn)檩d體,并通過層層自組裝的方法構(gòu)建一種可以有效治療耐藥性乳癌的負(fù)載體系。介孔聚合物納米球作為siRNA的載體還沒有人報道過,乳癌細(xì)胞是一種耐藥性高、Bcl-2高表達(dá)的細(xì)胞,因此我們希望可以構(gòu)建一種新的治療體系以期獲得良好的腫瘤治療效果。本論文通過軟模板合成方法制備介孔聚合物納米球（MPNs）作為負(fù)載siRNA的載體。實(shí)驗(yàn)采用自組裝聚合和200℃水熱處理等方法制備球形均一、結(jié)構(gòu)完整的介孔納米球。通過改性使合成的介孔納米球成為陽離子納米載體,并分別考察了不同小分子改性納米球?qū)ω?fù)載率的影響以及在不同pH下、在納米載體表面有無包覆大分子層的條件下的釋放情況。在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中,利用MTT法和熒光顯微鏡手段考察了載體以及負(fù)載體系的生物相容性;利用流式細(xì)胞術(shù)和熒光顯微鏡手段考察并比較了在不同條件下的負(fù)載體系對癌細(xì)胞內(nèi)吞效果和凋亡情況的影響;利用RT-PCR和Wes... 

【文章來源】：西南交通大學(xué)四川省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：94 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖.目nc日n.

西南交通大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文 第 19 頁小燒杯中，避光攪拌至混合均勻；配制0.1mol/L NaOH溶液15mL加入到上述混合溶液中，在70℃油浴鍋中反應(yīng)半小時；取0.96gF-127加入15mLRO水，攪拌至溶液透明，再加入至上述反應(yīng)溶液中。反應(yīng)兩小時后，加入50mLRO水稀釋。當(dāng)溶液變?yōu)榫萍t色并出現(xiàn)少許沉淀的時候結(jié)束反應(yīng)，全程反應(yīng)均需避光，以防止苯酚發(fā)生分解。靜置一段時間直至沉淀溶解，將所得液體與RO水按比例17.7：56稀釋后轉(zhuǎn)移至聚四氟乙烯內(nèi)襯的反應(yīng)釜中，130℃下水熱反應(yīng)8小時；隨后在200℃下水熱處理完成去模板過程。將所得產(chǎn)物進(jìn)行離心洗滌、冷凍干燥、收集，并進(jìn)行表征和后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

2.1聚合物納米球表面負(fù)電性化定量MPNs于燒杯中，加RO水超聲30min分散均勻。根據(jù)文獻(xiàn)配制一定酸與硝酸體積比為3：1），緩慢加入到MPNs分散液中，60℃下反應(yīng)4h。產(chǎn)物進(jìn)行抽濾洗滌，直到洗滌液pH達(dá)到中性，收集沉淀并冷凍干燥，OMPNs。聚合物納米球表面氨基功能化gOMPNs加入到40mLPBS緩沖液（pH=6）中，將PEI（Mw=600，600m緩沖液中并加入到上述溶液中，繼續(xù)攪拌反應(yīng)過夜。同樣地，取精氨酸（mol）溶于5mL緩沖液中并加入到上述溶液中，繼續(xù)攪拌反應(yīng)過夜。離并多次洗滌，洗去未反應(yīng)物質(zhì)、冷凍干燥收集，干燥產(chǎn)物分別定義為OMNs-Arg。合物納米球的表面氨基功能化過程如圖2.2所示。


本文編號：3404899