GGB是抗旱負(fù)調(diào)控基因。為了獲得擬南芥ggb突變體材料,構(gòu)建了以擬南芥U6啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)GGBsgRNA的CRISPR/Cas9基因組編輯載體。將構(gòu)建好的編輯載體利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的浸花法轉(zhuǎn)化野生型擬南芥。對(duì)轉(zhuǎn)基因后代GGB基因的測(cè)序結(jié)果分析發(fā)現(xiàn),在靶位點(diǎn)處有缺失4個(gè)堿基和增加1個(gè)T堿基的2種突變體產(chǎn)生。分別對(duì)野生型擬南芥和上述2種ggb突變體進(jìn)行半定量RT-PCR分析結(jié)果顯示,突變體材料中幾乎檢測(cè)不到GGB基因表達(dá),說(shuō)明獲得了GGB基因敲除突變體。對(duì)野生型和ggb突變體葉片失水率、耐旱表型及單株種子量的測(cè)定結(jié)果表明,與野生型相比,擬南芥GGB基因突變后,葉片失水率顯著減少,抗旱性明顯增強(qiáng),而單株種子量卻并沒(méi)有改變。研究表明,GGB是一種理想的作物分子育種的候選靶基因,獲得的突變體為今后從農(nóng)作物中克隆的GGB同源基因進(jìn)行功能互補(bǔ)驗(yàn)證提供了有用的遺傳材料。 

【文章來(lái)源】：西北植物學(xué)報(bào). 2016,36(05)北大核心CSCD

【文章頁(yè)數(shù)】：8 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 實(shí)驗(yàn)材料
    1.2 方法
        1.2.1 sgRNA表達(dá)載體構(gòu)建
        1.2.2 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化載體構(gòu)建
        1.2.3 擬南芥遺傳轉(zhuǎn)化
        1.2.4 擬南芥ggb突變體檢測(cè)
        1.2.5 AtGGB基因表達(dá)RT-PCR檢測(cè)
        1.2.6 擬南芥離體葉片失水率測(cè)定
        1.2.7 抗旱表型鑒定及單株種子量測(cè)定
2 結(jié)果與分析
    2.1 AtGGB突變位點(diǎn)選擇
    2.2 CRISPR/Cas9基因編輯載體構(gòu)建
    2.3 Atggb突變體檢測(cè)
    2.4 AtGGB基因表達(dá)量檢測(cè)
    2.5 Atggb突變體失水率測(cè)定
    2.6 Atggb突變體耐旱性表型鑒定
    2.7 Atggb突變體單株種子量測(cè)定
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Targeted Mutagenesis in Zea mays Using TALENs and the CRISPR/Cas System[J]. Zhen Liang,Kang Zhang,Kunling Chen,Caixia Gao.  Journal of Genetics and Genomics. 2014(02)



本文編號(hào)：3402304