【目的】探究苦蕎蔗糖合酶結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系,構(gòu)建表達(dá)載體以實(shí)現(xiàn)SuSy基因在大腸桿菌中的表達(dá),并經(jīng)親和層析純化后得到重組SuSy蛋白,為進(jìn)一步研究該酶的結(jié)構(gòu)和功能奠定基礎(chǔ).【方法】以苦蕎（Fagopyrum tataricum）cDNA文庫中克隆得到的蔗糖合酶基因重組質(zhì)粒為模板,PCR擴(kuò)增得到SuSy編碼序列,將其與原核生物表達(dá)載體pET28a相連接構(gòu)建了重組表達(dá)載體pET28a-SuSy,經(jīng)EcoRⅠ和SalⅠ雙酶切及測(cè)序鑒定正確后將其轉(zhuǎn)入大腸桿菌（Escherichia coli）感受態(tài)細(xì)胞BL21,經(jīng)異丙基-β-D-硫代半乳糖苷誘導(dǎo)表達(dá)SuSy重組蛋白,并對(duì)其誘導(dǎo)表達(dá)條件進(jìn)行優(yōu)化.【結(jié)果】在37℃、1.2 mmol/L IPTG誘導(dǎo)10 h時(shí),SuSy蛋白表達(dá)量最高,分子量大小約為53.4 ku,超聲破碎后經(jīng)SDS-PAGE檢測(cè)到該蛋白以包涵體形式存在.【結(jié)論】利用Co²⁺親和柱層析純化和His-tag鑒定得到了高純度的重組SuSy蛋白,為該酶結(jié)構(gòu)與功能的研究及多克隆抗體制備奠定了基礎(chǔ). 

【文章來源】：甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 2020,55(03)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：7 頁

【部分圖文】：

包涵體復(fù)性結(jié)果分析

純化SuSy的SDS-PAGE

電泳結(jié)果如圖1所示,在1 000～2 000 bp之間有1條特異DNA條帶(圖1),大小與預(yù)期結(jié)果一致.圖2 重組質(zhì)粒pET-28a-SuSy的PCR和雙酶切鑒定

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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