造血干細胞（HSCs）是造血系統(tǒng)中具有自我更新及分化成所有成熟血液譜系能力的一小群細胞,因此它們對于維持機體的造血內穩(wěn)態(tài)以及免疫功能尤為重要。雖然HSCs移植已經被認為是治療部分造血系統(tǒng)惡性腫瘤、骨髓或造血障礙以及免疫缺陷的有效療法,但是在臨床上仍存在局限,比如骨髓移植以及外周血造血干細胞移植的配型困難、供體不足以及免疫排斥反應等等。而臍帶血造血干細胞移植雖然克服了這些困難,但單個臍帶中的HSCs的數(shù)量有限,不足以滿足病人的造血重建需求。因此,體外擴增HSCs技術就成為了有極大可能突破上述壁壘的武器。目前已有研究指出體外使用p38MAPK信號通路抑制劑和GSK3信號通路抑制劑可有效擴增HSCs,但這些研究中體外培養(yǎng)的對象大多是經過分選的LSK細胞,而面對臨床的迫切治療需求,這類方法繁雜的程序或成為它的短板,更需要重視的是,細胞經過體外一系列的流式分選處理勢必會受到不同程度的損傷。因此,能夠有效擴增HSCs又能最大程度上減少細胞的損傷,就成為了我們的研究初衷。本課題研究采用全骨髓細胞體外培養(yǎng),通過這種方式簡化了以往研究的繁瑣步驟并且減少了細胞損傷。糖原合成激酶3（GSK-3）是一種絲氨酸... 

【文章來源】：上海師范大學上海市

【文章頁數(shù)】：61 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞表
第1章 緒論
    1.1 GSK3的活性調節(jié)
    1.2 GSK3的底物
    1.3 GSK3的功能
        1.3.1 GSK3α和GSK3β功能相似
        1.3.2 GSK3α和GSK3β的功能各異
    1.4 GSK3在骨骼發(fā)育中的作用
    1.5 GSK3在造血中的作用
    1.6 GSK3抑制劑與mTOR抑制劑的聯(lián)用
    1.7 GSK3與人類疾病
    1.8 展望
第2章 GSK3與p38信號通路抑制劑對HSC擴增的影響
    2.1 前言
    2.2 實驗材料
        2.2.1 小鼠
        2.2.2 實驗儀器和設備
        2.2.3 實驗耗材
        2.2.4 實驗試劑
    2.3 實驗方法
        2.3.1 實驗試劑的配制
        2.3.2 C57BL/6J小鼠骨髓單細胞懸液的制備
        2.3.3 細胞計數(shù)
        2.3.4 造血干細胞體外培養(yǎng)
        2.3.5 體外培養(yǎng)后的造血干細胞的收集
        2.3.6 流式分析染色
        2.3.7 流式分析操作
        2.3.8 統(tǒng)計學分析
    2.4 實驗結果
        2.4.1 GSK3 信號通路抑制劑 CHIR99021 和 SB216763 抑制劑擴增作用的比較
        2.4.2 GSK3β信號通路抑制劑SB216763合適濃度的確定
        2.4.3 GSK3β信號通路抑制劑 SB216763 和 p38 信號通路抑制劑SB203580 的聯(lián)合使用
    2.5 小結
第3章 信號通路抑制劑聯(lián)合處理對造血重建的影響
    3.1 引言
    3.2 實驗材料
        3.2.1 小鼠
        3.2.2 實驗耗材
        3.2.3 實驗試劑
    3.3 實驗方法
        3.3.1 實驗試劑的配制
        3.3.2 CD45.1小鼠全骨髓單細胞懸液的制備
        3.3.3 細胞計數(shù)
        3.3.4 小鼠全骨髓細胞的體外培養(yǎng)
        3.3.5 體外培養(yǎng)后全骨髓細胞的收集
        3.3.6 競爭性移植
        3.3.7 小鼠外周血采集
        3.3.8 小鼠外周血流式分析
        3.3.9 克隆形成實驗
        3.3.10 統(tǒng)計學分析
    3.4 體外競爭性移植實驗的設計
    3.5 實驗結果
        3.5.1 抑制劑聯(lián)合處理對造血干細胞移植后嵌合能力的影響
        3.5.2 抑制劑聯(lián)合處理對造血干細胞長效造血重建能力的影響
        3.5.3 CFU實驗研究經過抑制劑聯(lián)合處理后的造血干細胞的多向重建能力
    3.6 小結
第4章 四種融合基因白血病細胞表型的觀察
    4.1 引言
    4.2 實驗材料
        4.2.1 細胞株及實驗試劑
        4.2.2 實驗耗材
        4.2.3 實驗設備
    4.3 實驗方法
        4.3.1 MLL-ENLShort細胞株的構建
        4.3.2 體內移植
        4.3.3 細胞周期分析
        4.3.4 藥物MTT法
        4.3.5 克隆形成實驗
        4.3.6 生長曲線
        4.3.7 細胞計數(shù)
        4.3.8 統(tǒng)計學分析
    4.4 實驗結果
        4.4.1 四種白血病細胞株的細胞周期比較
        4.4.2 四種白血病細胞株對阿糖胞苷的耐藥性比較
        4.4.3 四種白血病細胞株克隆數(shù)目及形態(tài)的比較
        4.4.4 四種白血病細胞株生長趨勢的比較
    4.5 小結
討論
參考文獻
致謝



本文編號：3386755