造血干細(xì)胞（HSCs）是造血系統(tǒng)中具有自我更新及分化成所有成熟血液譜系能力的一小群細(xì)胞,因此它們對(duì)于維持機(jī)體的造血內(nèi)穩(wěn)態(tài)以及免疫功能尤為重要。雖然HSCs移植已經(jīng)被認(rèn)為是治療部分造血系統(tǒng)惡性腫瘤、骨髓或造血障礙以及免疫缺陷的有效療法,但是在臨床上仍存在局限,比如骨髓移植以及外周血造血干細(xì)胞移植的配型困難、供體不足以及免疫排斥反應(yīng)等等。而臍帶血造血干細(xì)胞移植雖然克服了這些困難,但單個(gè)臍帶中的HSCs的數(shù)量有限,不足以滿足病人的造血重建需求。因此,體外擴(kuò)增HSCs技術(shù)就成為了有極大可能突破上述壁壘的武器。目前已有研究指出體外使用p38MAPK信號(hào)通路抑制劑和GSK3信號(hào)通路抑制劑可有效擴(kuò)增HSCs,但這些研究中體外培養(yǎng)的對(duì)象大多是經(jīng)過分選的LSK細(xì)胞,而面對(duì)臨床的迫切治療需求,這類方法繁雜的程序或成為它的短板,更需要重視的是,細(xì)胞經(jīng)過體外一系列的流式分選處理勢必會(huì)受到不同程度的損傷。因此,能夠有效擴(kuò)增HSCs又能最大程度上減少細(xì)胞的損傷,就成為了我們的研究初衷。本課題研究采用全骨髓細(xì)胞體外培養(yǎng),通過這種方式簡化了以往研究的繁瑣步驟并且減少了細(xì)胞損傷。糖原合成激酶3（GSK-3）是一種絲氨酸... 

【文章來源】：上海師范大學(xué)上海市

【文章頁數(shù)】：61 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞表
第1章 緒論
    1.1 GSK3的活性調(diào)節(jié)
    1.2 GSK3的底物
    1.3 GSK3的功能
        1.3.1 GSK3α和GSK3β功能相似
        1.3.2 GSK3α和GSK3β的功能各異
    1.4 GSK3在骨骼發(fā)育中的作用
    1.5 GSK3在造血中的作用
    1.6 GSK3抑制劑與mTOR抑制劑的聯(lián)用
    1.7 GSK3與人類疾病
    1.8 展望
第2章 GSK3與p38信號(hào)通路抑制劑對(duì)HSC擴(kuò)增的影響
    2.1 前言
    2.2 實(shí)驗(yàn)材料
        2.2.1 小鼠
        2.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器和設(shè)備
        2.2.3 實(shí)驗(yàn)耗材
        2.2.4 實(shí)驗(yàn)試劑
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 實(shí)驗(yàn)試劑的配制
        2.3.2 C57BL/6J小鼠骨髓單細(xì)胞懸液的制備
        2.3.3 細(xì)胞計(jì)數(shù)
        2.3.4 造血干細(xì)胞體外培養(yǎng)
        2.3.5 體外培養(yǎng)后的造血干細(xì)胞的收集
        2.3.6 流式分析染色
        2.3.7 流式分析操作
        2.3.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.4.1 GSK3 信號(hào)通路抑制劑 CHIR99021 和 SB216763 抑制劑擴(kuò)增作用的比較
        2.4.2 GSK3β信號(hào)通路抑制劑SB216763合適濃度的確定
        2.4.3 GSK3β信號(hào)通路抑制劑 SB216763 和 p38 信號(hào)通路抑制劑SB203580 的聯(lián)合使用
    2.5 小結(jié)
第3章 信號(hào)通路抑制劑聯(lián)合處理對(duì)造血重建的影響
    3.1 引言
    3.2 實(shí)驗(yàn)材料
        3.2.1 小鼠
        3.2.2 實(shí)驗(yàn)耗材
        3.2.3 實(shí)驗(yàn)試劑
    3.3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.3.1 實(shí)驗(yàn)試劑的配制
        3.3.2 CD45.1小鼠全骨髓單細(xì)胞懸液的制備
        3.3.3 細(xì)胞計(jì)數(shù)
        3.3.4 小鼠全骨髓細(xì)胞的體外培養(yǎng)
        3.3.5 體外培養(yǎng)后全骨髓細(xì)胞的收集
        3.3.6 競爭性移植
        3.3.7 小鼠外周血采集
        3.3.8 小鼠外周血流式分析
        3.3.9 克隆形成實(shí)驗(yàn)
        3.3.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3.4 體外競爭性移植實(shí)驗(yàn)的設(shè)計(jì)
    3.5 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.5.1 抑制劑聯(lián)合處理對(duì)造血干細(xì)胞移植后嵌合能力的影響
        3.5.2 抑制劑聯(lián)合處理對(duì)造血干細(xì)胞長效造血重建能力的影響
        3.5.3 CFU實(shí)驗(yàn)研究經(jīng)過抑制劑聯(lián)合處理后的造血干細(xì)胞的多向重建能力
    3.6 小結(jié)
第4章 四種融合基因白血病細(xì)胞表型的觀察
    4.1 引言
    4.2 實(shí)驗(yàn)材料
        4.2.1 細(xì)胞株及實(shí)驗(yàn)試劑
        4.2.2 實(shí)驗(yàn)耗材
        4.2.3 實(shí)驗(yàn)設(shè)備
    4.3 實(shí)驗(yàn)方法
        4.3.1 MLL-ENLShort細(xì)胞株的構(gòu)建
        4.3.2 體內(nèi)移植
        4.3.3 細(xì)胞周期分析
        4.3.4 藥物MTT法
        4.3.5 克隆形成實(shí)驗(yàn)
        4.3.6 生長曲線
        4.3.7 細(xì)胞計(jì)數(shù)
        4.3.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    4.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.4.1 四種白血病細(xì)胞株的細(xì)胞周期比較
        4.4.2 四種白血病細(xì)胞株對(duì)阿糖胞苷的耐藥性比較
        4.4.3 四種白血病細(xì)胞株克隆數(shù)目及形態(tài)的比較
        4.4.4 四種白血病細(xì)胞株生長趨勢的比較
    4.5 小結(jié)
討論
參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號(hào)：3386755