植物乳桿菌是葡萄酒蘋果酸-乳酸發(fā)酵過程中一類具有增香釀造潛力的乳酸菌,然而多數(shù)植物乳桿菌不能夠耐受葡萄酒酸性環(huán)境。因此,研究?jī)?yōu)良植物然乳桿菌的潛在耐酸基因,解析其在酸脅迫條件下的生理功能對(duì)揭示蘋果酸-乳酸發(fā)酵過程中的微生物種群演變規(guī)律以及生產(chǎn)實(shí)踐都有著重要的指導(dǎo)意義。本研究以從葡萄酒中分離的優(yōu)良植物乳桿菌XJ25為試驗(yàn)材料,以SA-680耐酸標(biāo)記基因?yàn)檠芯繉?duì)象,采用基因敲除的方式對(duì)植物乳桿菌SA-680耐酸標(biāo)記基因的生物學(xué)功能進(jìn)行解析,主要的研究結(jié)果如下:（1）甲基化修飾作用是影響敲除質(zhì)粒p LCNICK電轉(zhuǎn)化植物乳桿菌XJ25的主要原因;感受態(tài)細(xì)胞收集時(shí)間為OD600=0.2時(shí)的電轉(zhuǎn)化效率最高,達(dá)到1.83×105 CFU/μg DNA;在一定范圍內(nèi),植物乳桿菌XJ25電轉(zhuǎn)化效率隨著電場(chǎng)強(qiáng)度的增加而升高,在達(dá)到峰值（2.08×105 CFU/μg DNA）后下降;植物乳桿菌XJ25電轉(zhuǎn)化效率與質(zhì)粒濃度呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)的趨勢(shì),但與電擊次數(shù)不相關(guān)。（2）通過重疊延伸PCR技術(shù)和多片段一步克隆技術(shù)構(gòu)建了帶有不同sg RNA的靶基因敲除載體p LCNICK-△mdt-sg RNA1和p LCNIC... 

【文章來源】：西北農(nóng)林科技大學(xué)陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：55 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

酒酒球菌MLF的代謝路徑(Betteridgeetal.2015)

本研究技術(shù)路線

結(jié)果在紅霉素抗性平皿上出現(xiàn)了大量轉(zhuǎn)化子（如圖2-1）。在這一組試驗(yàn)中，感受態(tài)細(xì)胞收集時(shí)間為 OD600=0.3，電轉(zhuǎn)化時(shí)的質(zhì)粒加量為40 ng（稀釋于 10 μL 電擊緩沖液），電擊時(shí)的電場(chǎng)強(qiáng)度為 10 kV/cm，電擊兩次。圖 2-1 質(zhì)粒甲基化修飾對(duì)植物乳桿菌 XJ25電轉(zhuǎn)化的影響Fig. 2-1 Effect of plasmid methylation on the electrotransformation efficiency of L. plantarum XJ25由圖 2-1 可以看出，甲基化修飾的質(zhì)粒 pLCNICK 在電轉(zhuǎn)化植物乳桿菌 XJ25 后只能在紅霉素抗性平皿上長出數(shù)量非常少的單菌落，三個(gè)板上的數(shù)量分別為 2，8


本文編號(hào)：3382014