植物乳桿菌是葡萄酒蘋果酸-乳酸發(fā)酵過程中一類具有增香釀造潛力的乳酸菌,然而多數(shù)植物乳桿菌不能夠耐受葡萄酒酸性環(huán)境。因此,研究優(yōu)良植物然乳桿菌的潛在耐酸基因,解析其在酸脅迫條件下的生理功能對揭示蘋果酸-乳酸發(fā)酵過程中的微生物種群演變規(guī)律以及生產實踐都有著重要的指導意義。本研究以從葡萄酒中分離的優(yōu)良植物乳桿菌XJ25為試驗材料,以SA-680耐酸標記基因為研究對象,采用基因敲除的方式對植物乳桿菌SA-680耐酸標記基因的生物學功能進行解析,主要的研究結果如下:（1）甲基化修飾作用是影響敲除質粒p LCNICK電轉化植物乳桿菌XJ25的主要原因;感受態(tài)細胞收集時間為OD600=0.2時的電轉化效率最高,達到1.83×105 CFU/μg DNA;在一定范圍內,植物乳桿菌XJ25電轉化效率隨著電場強度的增加而升高,在達到峰值（2.08×105 CFU/μg DNA）后下降;植物乳桿菌XJ25電轉化效率與質粒濃度呈現(xiàn)負相關的趨勢,但與電擊次數(shù)不相關。（2）通過重疊延伸PCR技術和多片段一步克隆技術構建了帶有不同sg RNA的靶基因敲除載體p LCNICK-△mdt-sg RNA1和p LCNIC... 

【文章來源】：西北農林科技大學陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：55 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

酒酒球菌MLF的代謝路徑(Betteridgeetal.2015)

本研究技術路線

結果在紅霉素抗性平皿上出現(xiàn)了大量轉化子（如圖2-1）。在這一組試驗中，感受態(tài)細胞收集時間為 OD600=0.3，電轉化時的質粒加量為40 ng（稀釋于 10 μL 電擊緩沖液），電擊時的電場強度為 10 kV/cm，電擊兩次。圖 2-1 質粒甲基化修飾對植物乳桿菌 XJ25電轉化的影響Fig. 2-1 Effect of plasmid methylation on the electrotransformation efficiency of L. plantarum XJ25由圖 2-1 可以看出，甲基化修飾的質粒 pLCNICK 在電轉化植物乳桿菌 XJ25 后只能在紅霉素抗性平皿上長出數(shù)量非常少的單菌落，三個板上的數(shù)量分別為 2，8


本文編號：3382014