背景:鼠雙微粒體基因（murine double mimute2,MDM2）在人體腫瘤的發(fā)生和發(fā)展中起重大作用。MDM2蛋白是MDM2基因的產(chǎn)物,該產(chǎn)物是P53重要的負性調(diào)節(jié)因子,MDM2-P53通路是調(diào)節(jié)細胞周期穩(wěn)定、保持基因組穩(wěn)定以及細胞凋亡的重要機制,MDM2基因過表達會使P53的活性喪失,大多數(shù)人患癌均是由于P53的缺失。P53通過預防或修復潛在的致癌損傷或消除已經(jīng)開始致癌進展的細胞來抑制腫瘤的發(fā)生,P53調(diào)控轉(zhuǎn)錄的能力在腫瘤的形成中起著重要作用。從進化的角度來看,人體內(nèi)的P53水平是否能夠保持平衡與其腫瘤抑制能力具有很大的關系,而P53的蛋白水平能夠通過介導E3泛素連接酶MDM2蛋白來調(diào)控,MDM2基因通過P53途徑來調(diào)節(jié)人體內(nèi)的P53水平或非P53依賴途徑等多種方式調(diào)節(jié)細胞的異常增殖和凋亡。因此,MDM2基因是癌癥發(fā)生的一個重要的候選基因,先前的研究發(fā)現(xiàn)其啟動子區(qū)rs937283位點是一個能調(diào)控MDM2基因表達水平的單核苷酸多態(tài)性位點（single nucleotide polymorphism,SNP）,與個體對癌癥的易感性有關。鑒于此,本研究探索了MDM2基因啟動子區(qū)r... 

【文章來源】：武漢理工大學湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

基因組DNA瓊脂糖凝膠電泳圖

20表2-3MDM2基因rs937283位點引物序列設計引物引物序列（5’-3’）退火溫度產(chǎn)物長度酶，酶切溫度酶切片段長度正義鏈5’-GCGACCCCTCTGACCGA-3’60℃175bpAvaⅡ37℃A等位基因:175bp反義鏈5’-CCTCAAGACTCCCCAGTTTC-3’G等位基因：107bp+68bp2.4.3PCR產(chǎn)物的瓊脂糖凝膠電泳結果圖2-2PCR產(chǎn)物的瓊脂糖凝膠電泳圖我們對設計出來的MDM2基因rs937283位點的引物進行了PCR擴增，并對產(chǎn)物進行瓊脂糖凝膠電泳實驗，根據(jù)電泳結果，我們可以看到，引物的條帶單一并且明亮沒有雜帶，我們設計的產(chǎn)物實際長度是175bp，在凝膠電泳圖中顯示接近200bp，實驗結果驗證了引物設計的正確性。2.4.4PCR產(chǎn)物酶切分型我們采用PCR-RFLP分型技術進行了酶切分型，對擴增成功的產(chǎn)物進行了酶切實驗，按著要求將酶切體系配置完成后加入到PCR產(chǎn)物中，然后放在水浴鍋中進行孵育，隔日進行跑膠獲取分型數(shù)據(jù)。

21圖2-3PCR產(chǎn)物酶切分型根據(jù)PCR酶切片段長度：A等位基因長度在175bp，G等位基因長度在107bp和68bp，所以瓊脂糖凝膠電泳圖中的AA基因型有一條明亮的帶，條帶的長度為175bp；基因型AG有三條電泳條帶，條帶的長度分別為68bp、107bp、175bp；基因型GG有兩條電泳條帶，條帶的長度分別為68bp和107bp，從而可以根據(jù)產(chǎn)物酶切分型圖讀出三種基因型GG、AG、AA，然后對酶切分型結果進行整理，統(tǒng)計出三種基因型的數(shù)量，為后續(xù)的生物統(tǒng)計學分析做出工作。2.4.5分型基因的生物學分析統(tǒng)計方法根據(jù)瓊脂糖凝膠電泳對應的酶切片段長度讀出基因型，統(tǒng)計出正常組和癌癥組的基因型（GG、AG、AA）數(shù)量，然后計算出兩組對應的等位基因數(shù)量，將基因型和等位基因的數(shù)量匯總整理成數(shù)據(jù)表。建立六種基因模型（Gvs.A;GGvs.AA;AGvs.AA;GGvs.AG;GG+AGvs.AA;GGvs.AG+AA），用生物分析軟件STATA14.0進行邏輯回歸分析，根據(jù)邏輯回歸分析中的突變位點致病風險（oddratio,OR）值、95%置信區(qū)間（Confidenceinterval,CI）和顯著性差異的P值判斷MDM2基因rs937283位點與癌癥是否顯著相關，若OR值大于等于1，則該位點具有致病風險，說明該位點會增加癌癥的發(fā)病風險；若OR值小于1，則沒有致病風險。邏輯回歸分析的P值若小于0.05，說明正常對照組與癌癥組具有極顯著差異，具有生物學統(tǒng)計意義；若P值大于0.05，說明兩組之間沒有極顯著差異。若異質(zhì)性檢驗中的P值小于0.1，使用隨機效應模型計算組合OR值；若P值大于等于0.1，使用固定效應分析模型。


本文編號：3373619