【目的】CRISPR/Cas9是細(xì)菌和古細(xì)菌為免受外來DNA片段侵襲形成的一種適應(yīng)性免疫系統(tǒng)。CRISPR/Cas9已經(jīng)被作為一種基因編輯的工具廣泛應(yīng)用到很多動(dòng)物和植物的基因編輯。磷元素是植物生長過程中必需的營養(yǎng)元素,植物對磷的吸收主要由跨膜磷轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白完成。本研究利用CRISPR/Cas9技術(shù)對OryzaJaponicaKitaake水稻中冰葉日中花磷轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白McPht基因的同源體OsPht磷轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因進(jìn)行編輯,構(gòu)建了McPht轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因?qū)胨綩sPht缺失的突變體,初步驗(yàn)證了該突變體材料的功能�！痉椒ā客ㄟ^CRISPR/Cas9基因編輯手段,將水稻中與McPht蛋白同源性最高的磷轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因進(jìn)行編輯。首先將待編輯的基因片段連接到U3啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的pCXUN表達(dá)載體上,轉(zhuǎn)化到農(nóng)桿菌EHA105中,然后通過農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化到水稻幼胚,將獲得的轉(zhuǎn)化后再生T0代株系移栽到田間獲得T1代種子,并將T1代株系進(jìn)行盆栽培養(yǎng),提取株系葉片基因組DNA用于PCR檢測,所有株系PCR產(chǎn)物純化后進(jìn)行測序,依據(jù)序列變化判定目標(biāo)基因的編輯位點(diǎn),并對突變體進(jìn)行生理指標(biāo)測定�！窘Y(jié)果】1)基因編輯后的類型可分為兩類,... 

【文章來源】：植物營養(yǎng)與肥料學(xué)報(bào). 2017,23(05)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：11 頁

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：3372738