【目的】CRISPR/Cas9是細菌和古細菌為免受外來DNA片段侵襲形成的一種適應(yīng)性免疫系統(tǒng)。CRISPR/Cas9已經(jīng)被作為一種基因編輯的工具廣泛應(yīng)用到很多動物和植物的基因編輯。磷元素是植物生長過程中必需的營養(yǎng)元素,植物對磷的吸收主要由跨膜磷轉(zhuǎn)運蛋白完成。本研究利用CRISPR/Cas9技術(shù)對OryzaJaponicaKitaake水稻中冰葉日中花磷轉(zhuǎn)運蛋白McPht基因的同源體OsPht磷轉(zhuǎn)運蛋白基因進行編輯,構(gòu)建了McPht轉(zhuǎn)運蛋白基因?qū)胨綩sPht缺失的突變體,初步驗證了該突變體材料的功能�！痉椒ā客ㄟ^CRISPR/Cas9基因編輯手段,將水稻中與McPht蛋白同源性最高的磷轉(zhuǎn)運蛋白基因進行編輯。首先將待編輯的基因片段連接到U3啟動子驅(qū)動的pCXUN表達載體上,轉(zhuǎn)化到農(nóng)桿菌EHA105中,然后通過農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化到水稻幼胚,將獲得的轉(zhuǎn)化后再生T0代株系移栽到田間獲得T1代種子,并將T1代株系進行盆栽培養(yǎng),提取株系葉片基因組DNA用于PCR檢測,所有株系PCR產(chǎn)物純化后進行測序,依據(jù)序列變化判定目標基因的編輯位點,并對突變體進行生理指標測定。【結(jié)果】1)基因編輯后的類型可分為兩類,... 

【文章來源】：植物營養(yǎng)與肥料學(xué)報. 2017,23(05)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：11 頁

【參考文獻】：
期刊論文
[1]CRISPR-Cas9植物基因編輯系統(tǒng)敲除擬南芥AG基因表達載體的構(gòu)建[J]. 王曉霞,蘇哲,岳彩云,樊金會.  分子植物育種. 2016(03)
[2]水稻OsABC1K3突變體鑒定及其對強光脅迫的響應(yīng)[J]. 高清松,徐夢彬,袁彩勇,紀劍輝,周勇,梁國華.  中國農(nóng)業(yè)科學(xué). 2016(04)
[3]Targeted Mutagenesis in Zea mays Using TALENs and the CRISPR/Cas System[J]. Zhen Liang,Kang Zhang,Kunling Chen,Caixia Gao.  Journal of Genetics and Genomics. 2014(02)
[4]CRISPR/Cas系統(tǒng):RNA靶向的基因組定向編輯新技術(shù)[J]. 李君,張毅,陳坤玲,單奇?zhèn)?王延鵬,梁振,高彩霞.  遺傳. 2013(11)
[5]CRISPR/Cas9介導(dǎo)的基因組定點編輯技術(shù)[J]. 方銳,暢飛,孫照霖,李寧,孟慶勇.  生物化學(xué)與生物物理進展. 2013(08)
[6]CRISPR-Cas系統(tǒng)與細菌和噬菌體的共進化[J]. 李鐵民,杜波.  遺傳. 2011(03)

碩士論文
[1]番茄磷轉(zhuǎn)運蛋白SlPht3基因最小表達框轉(zhuǎn)化小麥對磷素營養(yǎng)的應(yīng)答[D]. 張殊慧.沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016
[2]小鹽芥ThPIP1基因的水稻遺傳轉(zhuǎn)化及耐鹽機理研究[D]. 強曉晶.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2015
[3]水稻磷酸鹽轉(zhuǎn)運蛋白基因家族的功能分析[D]. 常小箭.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
[4]通過RNAi研究水稻磷轉(zhuǎn)運蛋白基因生理功能[D]. 辛偉杰.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2008



本文編號：3372738