目的骨橋蛋白（OPN）在腫瘤的遷徙和轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用,但目前泡狀棘球蚴在宿主體內(nèi)遷徙和轉(zhuǎn)移機制尚不明確。文中旨在擴增多房棘球絳蟲OPN全長基因序列并進(jìn)行其生物學(xué)分析。方法提取泡球蚴原頭節(jié)總RNA,逆轉(zhuǎn)錄成cDNA,從基因數(shù)據(jù)庫中通過BLAST找到可能的OPN基因保守序列片段設(shè)計引物,PCR擴增目的基因測序并鑒定其為同源性片段,然后應(yīng)用RACE方法對該目的基因進(jìn)行擴增。對得到的泡球蚴OPN全長基因序列進(jìn)行功能和結(jié)構(gòu)分析。結(jié)果泡球蚴OPN cDNA全長1390 bp。相對分子質(zhì)量為50 363.75,理論等電點（pl）為11.18,其中含有411個腺嘌呤、297個胞嘧啶、334個鳥嘌呤、348個胸腺嘧啶。ORF長度為849 bp,編碼641個氨基酸,始于96 bp,止于944 bp。二級結(jié)構(gòu)預(yù)測α-螺旋（h）占20.81%,β-折疊（e）占15.26%,β-轉(zhuǎn)角（t）占10.08%,無規(guī)則卷曲（c）占53.85%。結(jié)論成功克隆了泡球蚴OPN基因并研究分析其序列及蛋白,為其功能研究奠定了基礎(chǔ)。 

【文章來源】：醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報. 2020,33(10)北大核心

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

泡球蚴總RNA提取

以cDNA為模板PCR擴增泡球蚴OPN基因同源片段,獲得目的基因片段,見圖2。測序序列上傳至NCBI BLAST與EMmg-13d08.q1k比對同源性為97%。2.3 泡球蚴OPN基因3′RACE、5′RACE擴增結(jié)果

3′RACE巢氏PCR擴增后將產(chǎn)物切膠回收測序得到一長度為113 bp帶有PolyA尾的堿基序列。5′RACE 巢氏PCR擴增后將產(chǎn)物回收與pMDl8-T 載體連接,進(jìn)行菌落PCR后正反雙向測序分別得到長度為582 bp、578 bp的序列,經(jīng)工具拼接長度為955 bp大小堿基序列。見圖3。2.4 獲得泡球蚴OPN全長序列及生物學(xué)分析

【參考文獻(xiàn)】：
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碩士論文
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本文編號：3352826