目的:本研究旨在探索沉默信息調(diào)節(jié)因子1（silent information regulator1,SIRT1）在乳腺癌中的表達(dá)水平和對乳腺癌MCF-7細(xì)胞增殖、遷移和侵襲能力的影響,并對其可能的作用機(jī)制進(jìn)行初步探索,以期為乳腺癌的診斷、治療提供新的思路。方法:1、通過免疫組織化學(xué)實驗測定乳腺癌組織和癌旁組織中SIRT1的表達(dá)情況。2、通過實時熒光定量PCR（q RT-PCR）技術(shù)和蛋白免疫印跡（Western-blot）技術(shù)測定人正常乳腺上皮細(xì)胞MCF-10A、人乳腺癌細(xì)胞MCF-7、MDA-MB-231中SIRT1 m RNA和蛋白的表達(dá)水平。3、通過慢病毒載體轉(zhuǎn)染技術(shù)分別下調(diào)、上調(diào)SIRT1在MCF-7細(xì)胞中的表達(dá),并應(yīng)用q RT-PCR技術(shù)和Western-blot技術(shù)驗證轉(zhuǎn)染效率,獲取穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株。4、通過CCK-8增殖實驗檢測下調(diào)和上調(diào)SIRT1后各組細(xì)胞的增殖能力。5、通過Transwell遷移實驗和Transwell侵襲實驗檢測下調(diào)和過表達(dá)SIRT1后各組細(xì)胞的遷移、侵襲能力。6、通過Western-blot技術(shù)檢測SIRT1下調(diào)和上調(diào)后對p53、p125蛋白表達(dá)水平的影... 

【文章來源】：廣西醫(yī)科大學(xué)廣西壯族自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：91 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

免疫組化測定SIRT1在人乳腺癌組織（A）和癌旁組織（B）的表達(dá)情況（×100）

SIRT1 基因?qū)θ橄侔?MCF-7 細(xì)胞增殖、遷移和侵襲的影響及作用機(jī)制初探 qRT-PCR 結(jié)果顯示，SIRT1 mRNA 在 MCF-10A（ 1.01±0.12 ） , 在 MCF-7 細(xì) 胞中 的 相 對表 達(dá) MDA-MB-231 中的相對表達(dá)量為（2.65±0.23），組＜0.05）。經(jīng)兩兩比較得出，MCF-7 細(xì)胞中 SIRT1MDA-MB-231 細(xì)胞（p＜0.05）和 MCF-10A 細(xì)胞（細(xì)胞中 SIRT1 mRNA 相對表達(dá)量也高于 MCF-10A

圖 4-3 Western-blot 檢測 SIRT1 在 MCF-10A、MCF-7、MDA-MB-231 中的蛋白相對表達(dá)量與 MCF-10A 細(xì)胞和 MDA-MB-231 細(xì)胞相比；**P<0.05，與 MCF-10A 細(xì)胞和 MCF-7 細(xì)胞Fig.4-3 The protein levels of SIRT1 was measured in MCF-10A cells、MCF-7 cells and MDcells by Western-blot. *P<0.05 versus MCF-10A cells and MDA-MB-231 cells; **P<0MCF-10A and MCF-7 cells.3、慢病毒載體轉(zhuǎn)染 MCF-7 細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率3.1 GFP（綠色熒光蛋白）法驗證轉(zhuǎn)染效率在 MOI=30 的條件下，用沉默和過表達(dá) SIRT1 慢病毒顆粒、相性對照慢病毒顆粒感染MCF-7 細(xì)胞，分組為 KD 組（下調(diào) SIRT1 組）、組（下調(diào) SIRT1 陰性對照組）,OE 組（上調(diào) SIRT1 組）、NC-OE 組SIRT1 陰性對照組）、Control 組（空白對照組）。72h 后倒置熒光顯觀察熒光細(xì)胞所占比例，對轉(zhuǎn)染效率進(jìn)行初步判斷。當(dāng)熒光細(xì)胞比

【參考文獻(xiàn)】：
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本文編號：3347762