微小牛蜱是寄生于家畜體表最常見的蜱類之一,多寄生于牛,叮咬后會引起皮炎和貧血,并可以充當(dāng)許多致病微生物的傳播媒介。微小牛蜱有許多的分支（A-E分支）,因此通過形態(tài)特征、寄主或地理來源等方法達(dá)到準(zhǔn)確鑒定和區(qū)分微小牛蜱及其親緣相近的蜱類物種是困難的。本論文以微小牛蜱為研究對象,應(yīng)用分子生物學(xué)的方法,對其核糖體內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)（Internal transcribed spacers,ITS）及線粒體DNA（mt DNA）序列進行測定和分析,尋找合適的分子標(biāo)記準(zhǔn)確鑒定微小牛蜱,同時對微小牛蜱遺傳進化和基因多態(tài)性進行探究。本研究的第一部分對微小牛蜱ITS（ITS-1、ITS-2）序列進行擴增和測序,探究微小牛蜱內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)是否可以作為微小牛蜱分類鑒定的標(biāo)記基因。本文以中國湖南省、貴州省、海南省、河南省四個省份35只微小牛蜱為研究對象,我們獲得微小牛蜱ITS1、ITS2序列,長度分別為1635 bp、1151 bp。通過序列分析發(fā)現(xiàn),微小牛蜱ITS1基因種內(nèi)和其他蜱蟲之間的種間差異分別為0-0.9%,42.9-54.9%;微小牛蜱ITS2基因種內(nèi)和其他蜱蟲之間的種間差異分別為0-0.3%,35.6%... 

【文章來源】：湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)湖南省

【文章頁數(shù)】：73 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

中國不同地區(qū)微小牛蜱代表性樣品ITS1序列PCR產(chǎn)物的電泳圖

15MrepresentsaDNAsizemarker(ordinatevaluesinbp)；Lanes1-14representsamplesnegative(no-DNA)control,GZ1,GZ4,GZ7,HE2,HE5,XX1,SY2,SY4,LD3,LD5,JS2,JS6andHAI,respectively.圖2-2中國不同地區(qū)微小牛蜱代表性樣品ITS2序列PCR產(chǎn)物的電泳圖Fig2-2：AgarosegelelectrophoresisofPCRproductsofITS2fromRhipicephalusmicroplussamplesfromdifferentlocationsinChinaM：DL-2000分子量標(biāo)準(zhǔn)；1-14分別是陰性對照，GZ1，GZ4，GZ7，HE2，HE5，XX1，SY2，SY4，LD3，LD5，JS2，JS6，HAI1MrepresentsaDNAsizemarker(ordinatevaluesinbp)；Lanes1-14representsamplesnegative(no-DNA)control,GZ1,GZ4,GZ7,HE2,HE5,XX1,SY2,SY4,LD3,LD5,JS2，JS6andHAI1,respectively.2.3.2測序結(jié)果通過對微小牛蜱ITS-1、ITS-2序列進行測序并將所獲得的35條微小牛蜱基因序列輸入NABI系統(tǒng)Blast進行比對，比對后的結(jié)果顯示所有序列均為微小牛蜱的基因序列。通過DNAMAN序列校準(zhǔn)軟件的分析，得知所獲得部分ITS-1與5.8s序列的總長度為1860bp,其中ITS-1長度為1635bp，其G+C含量50.7%-51%。部分5.8s、ITS-2全長與部分18s長度為1350bp，ITS-2全長為1151bp,其G+C含量51.5%-51.7%。將獲得的ITS-1序列與ITS-2序列提交到GenBank，獲得微小牛蜱ITS-1、ITS-2基因的登錄號見表2-4。湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)全日制專業(yè)碩士學(xué)位論文

湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)全日制專業(yè)碩士學(xué)位論文18圖2-3微小牛蜱ITS-1序列的種內(nèi)種間變異率Fig2-3InterspecticvariationrateofITS-1ofRhipicephalusmicroplus2.3.3.2ITS-2序列差異性分析將35條微小牛蜱ITS-2序列與GenBank已收錄的兩條微小牛蜱ITS-2（KC203368、MG978179）序列進行種內(nèi)差異性分析，與三條同屬于扇頭蜱的蜱蟲（短小扇頭蜱：AF271282、血紅扇頭蜱：KU364296、附加扇頭蜱：KY457501)進行種間差異性分析。數(shù)據(jù)表明ITS-2種內(nèi)差異性0-0.3%；種間差異性為35.6-40.7%；通過ITS-2基因進一步觀察不同地域?qū)ξ⑿∨ｒ绲幕蜻z傳表達(dá)是否有影響。結(jié)果表明，同省分或不同省份，微小牛蜱ITS-2基因表達(dá)未出現(xiàn)因地理不同而產(chǎn)生差異的現(xiàn)象。微小牛蜱ITS-2基因遺傳多態(tài)性分析見圖2-4。圖2-4微小牛蜱ITS-2序列的種內(nèi)種間變異率Fig2-4InterspecticvariationrateofITS-2ofRhipicephalusmicroplus

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本文編號：3347586