1,3-丙二醇（1,3-propanediol,1.3-PD）是August Freund在巴氏梭菌發(fā)酵的甘油發(fā)酵液中發(fā)現(xiàn)的。它是一種重要的化工原料。聚對苯二甲酸丙酯（PTT）的工業(yè)應(yīng)用使1,3-丙二醇具有很強(qiáng)的應(yīng)用前景和巨大的商業(yè)價(jià)值。本課題通過改造pET-28a質(zhì)粒,構(gòu)建新的表達(dá)載體,并在Klebsiella中分別強(qiáng)化表達(dá)來自Klebsiella中的dhaT基因和來自E.coli中的yqhD基因所編碼的1,3-丙二醇氧化還原酶,目的是為了提高從甘油到1.3-PD的轉(zhuǎn)化,研究其對Klebsiella產(chǎn)1,3-PD的影響。為了提高微生物發(fā)酵生產(chǎn)1,3-丙二醇的產(chǎn)量,降低成本,提高微生物發(fā)酵生產(chǎn)1,3-丙二醇的競爭力,必須獲得高產(chǎn)、轉(zhuǎn)化率高的菌株。針對上述內(nèi)容,本論文開展了以下研究工作:（1）改造了pET-28a質(zhì)粒啟動(dòng)子,構(gòu)建新的表達(dá)載體重組肺炎克雷伯菌pET-P_tac-dhaT、pET-P_tac-yqhD、pET-P_dhat-dhaT和pET-P_dhat-yqhD,用來過表達(dá)dhaT基因和yqhD... 

【文章來源】：齊魯工業(yè)大學(xué)山東省

【文章頁數(shù)】：59 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

實(shí)驗(yàn)流程圖

圖 2.1 pET-Ptac-dhaT and pET-Ptac-yqhD 質(zhì)粒載體的構(gòu)建Fig. 2.1 Construction of pET-Ptac-dhaT and pET-Ptac-yqhD plasmid ve-Pdhat-yqhD 和 pET-Pdhat-dhaT 表達(dá)載體的構(gòu)建合成的 Pdhat啟動(dòng)子基因?yàn)槟０澹靡?Pdhat-F/Pdhat-R 196 bp 的 Pdhat啟動(dòng)子基因片段，采用限制性內(nèi)切酶 Bgl 片段和 pET-28a 質(zhì)粒進(jìn)行雙酶切，再用 T4 連接酶連接得別用引物 dhaT-F/dhaT-R 和 yqhD-F/yqhD-R 經(jīng)過 PCR 擴(kuò)dhaT 基因片段和 1164 bp 的 yqhD 基因片段，采用限制性 dhaT 基因片段、yqhD 基因片段以及 pET-Pdhat重組載體進(jìn)酶連接得到 pET-Pdhat-dhaT 和 pET-Pdhat-yqhD 兩個(gè)重組載因測序，測序正確后，再進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)，其構(gòu)建示意圖

圖 2.2 pET-Pdhat-dhaT 和 pET-Pdhat-yqhD 質(zhì)粒載體的構(gòu). 2.2 Construction of pET-Pdhat-dhaT and pET-Pdhat-yqhD pla段的擴(kuò)增的引物擴(kuò)增目的基因，利用高保真 DNA 聚合酶擴(kuò)：表 2.13PCR 反應(yīng)體系Table 2.13 PCR amplification reaction system反應(yīng)組分 體積（anta Max Master MixPrimer IPrimer IIModelddH2O總體積333395

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]1,3-丙二醇產(chǎn)生菌基因組重排育種[J]. 盧圣國,李霜,羅芳,祝揚(yáng)揚(yáng),熊俊,孟慶雄.  微生物學(xué)報(bào). 2011(04)
[2]氣相色譜快速分析1,3-丙二醇發(fā)酵液中醇類[J]. 惠友權(quán),趙杰.  應(yīng)用化工. 2008(08)
[3]兩種策略實(shí)現(xiàn)1,3-丙二醇關(guān)鍵酶基因的共表達(dá)[J]. 曲薈錦,王鳳寰,田平芳,譚天偉.  北京化工大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2007(04)
[4]甘油脫水酶基因（gldABC）與1,3-丙二醇氧化還原酶基因（dhaT）的共表達(dá)[J]. 鄭艷,管藝飛,劉長江.  食品與發(fā)酵工業(yè). 2007(03)
[5]1,3-丙二醇分批發(fā)酵動(dòng)力學(xué)模型[J]. 程可可,林日輝,劉宏娟,劉德華.  過程工程學(xué)報(bào). 2005(04)
[6]1,3-丙二醇發(fā)酵液的絮凝預(yù)處理研究[J]. 李凡鋒,周玉杰,劉德華.  微生物學(xué)通報(bào). 2004(03)
[7]編碼1,3-丙二醇氧化還原酶基因的克隆和表達(dá)[J]. 遲乃玉,劉長江,劉英昊,張慶芳,鄭學(xué)仿.  微生物學(xué)報(bào). 2003(06)
[8]1,3-丙二醇合成方法研究[J]. 馮婧微,張洪林,蔣林時(shí),白雪峰.  化工科技. 2002(06)
[9]1,3-丙二醇發(fā)酵條件的探索[J]. 朱丙田,劉德華,任海玉,謝東明,劉天中.  化工冶金. 2000(04)
[10]1,3-丙二醇的微生物法生產(chǎn)分析[J]. 修志龍.  現(xiàn)代化工. 1999(03)

碩士論文
[1]克雷伯氏菌發(fā)酵生產(chǎn)1，3-丙二醇工藝研究[D]. 任良棟.齊魯工業(yè)大學(xué) 2013



本文編號：3324237