目的紅細(xì)胞是哺乳動(dòng)物體內(nèi)含量最多的造血細(xì)胞。紅細(xì)胞的形成過(guò)程起始于造血干細(xì)胞定向增殖分化形成紅系祖細(xì)胞,接著進(jìn)入到紅系終末分化階段,經(jīng)數(shù)次有絲分裂依次分化為原幼紅細(xì)胞、早幼紅細(xì)胞、中幼紅細(xì)胞和晚幼紅細(xì)胞,隨后晚幼紅細(xì)胞會(huì)脫核形成網(wǎng)織紅細(xì)胞,最后發(fā)育分化為成熟的紅細(xì)胞。伴隨著這個(gè)紅系發(fā)育過(guò)程會(huì)發(fā)生細(xì)胞凋亡的現(xiàn)象,被稱為eryptosis。有研究表明,在病理性和生理性條件下,細(xì)胞凋亡的發(fā)生都對(duì)成熟紅細(xì)胞的產(chǎn)生有一定的作用。而凋亡基因RTN3是介導(dǎo)真核細(xì)胞三大凋亡通路的關(guān)鍵基因,通過(guò)對(duì)RTN3的研究,初步探索其在紅系發(fā)育過(guò)程中的作用。方法為了研究RTN3在紅系發(fā)育過(guò)程中的功能影響,我們首先構(gòu)建RTN3敲低和過(guò)表達(dá)載體,通過(guò)慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)的方法分別得到RTN3敲低和過(guò)表達(dá)的K562和HEL細(xì)胞,從RNA水平和蛋白水平分別驗(yàn)證了RTN3的表達(dá)情況。其次用氯化高鐵血紅素誘導(dǎo)RTN3敲低型和過(guò)表達(dá)型的K562和HEL細(xì)胞向紅系分化,與對(duì)照組相比,檢測(cè)RTN3敲低和過(guò)表達(dá)對(duì)細(xì)胞增殖、分化和凋亡的改變。最后利用臍帶血CD34⁺細(xì)胞進(jìn)行體外定向紅系分化的探究,以慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)的方法敲低和過(guò)表... 

【文章來(lái)源】：鄭州大學(xué)河南省 211工程院校

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

紅細(xì)胞的正常發(fā)育過(guò)程(引自文獻(xiàn)[13]

圖 1.2 哺乳動(dòng)物細(xì)胞動(dòng)物三條凋亡通路(引自文獻(xiàn)[41]).2.3.1 線粒體通路細(xì)胞合成 ATP 的主要場(chǎng)所是線粒體，它也被稱為能量工廠。細(xì)胞程中的多個(gè)生物學(xué)事件都和線粒體這個(gè)細(xì)胞器存在一定的關(guān)系[42-44]

提前配制好 0.8%的瓊脂糖膠，PCR 和酶切分別結(jié)束之后，開(kāi)始跑凝膠電泳，120V，25min； 跑膠完成用照膠儀進(jìn)行曝光得到跑膠圖 2.2A 和 2.2B，在紫外光下切相應(yīng)的條帶并按膠回收試劑盒說(shuō)明書完成膠回收，最終得到酶切的線性過(guò)表達(dá)載體和 PCR 膠回收產(chǎn)物；

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]紅細(xì)胞衰老及程序性死亡機(jī)制[J]. 王瑜,劉興順.  中國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志. 2014(04)
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[6]細(xì)胞凋亡的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制研究進(jìn)展[J]. 焦俊霞,高維娟.  中國(guó)老年學(xué)雜志. 2010(06)
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碩士論文
[1]內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白3參與自噬并影響膽固醇流出機(jī)制初探[D]. 梁龍.中南大學(xué) 2014



本文編號(hào)：3320522