突變體的創(chuàng)建與分析是功能基因組學(xué)的重要研究內(nèi)容,為基因功能分析提供了直接的工具材料。創(chuàng)建飽和的基因突變?nèi)后w是分離、鑒定基因功能最直接、最有效的方法之一。長穗偃麥草Fhb7基因是小麥優(yōu)異的赤霉病抗源,對Fhb7基因的功能分析將有助于該基因在小麥抗赤霉病育種的有效利用。但Fhb7基因與黃色素合成相關(guān)基因連鎖,使小麥面粉黃色素含量高,對Fhb7基因的廣泛應(yīng)用具有一定限制。本研究擬利用化學(xué)誘變劑甲基磺酸乙酯（ethyl methane sulfonate,EMS）溶液誘變處理攜帶抗赤霉病Fhb7小麥-長穗偃麥草易位系材料,初步創(chuàng)建了攜帶抗赤霉病Fhb7易位系突變?nèi)后w,并對Fhb7基因作了TILLING檢測,同時篩選到一些面粉色澤相關(guān)突變體,得出的主要結(jié)果如下:1.利用濃度為0.8%EMS溶液處理含F(xiàn)hb7短片段易位系的濟麥22背景材料,M1代收獲7309單穗,通過單粒傳獲得4473個M2代單株的群體。2.利用來自M2代群體的約4000個單株,單株提取DNA,對目的基因Fhb7進行TILLING篩選,直接測序（Sanger）Fhb7的全長PCR產(chǎn)物。每個點突變的純合和雜合利用DNAMAN軟件進行... 

【文章來源】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)山東省

【文章頁數(shù)】：55 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

EMS突變體對Fhb7的功能驗證（a）突變體壞死斑的面積統(tǒng)計（b）離體葉片鑒定表型Fig.1FunctionalverificationofEMSmutanttofhb7

小麥EMS突變?nèi)后w的創(chuàng)建及功能基因的鑒定28表4面粉色澤相關(guān)突變體的繁殖加代Table4PropagationandgenerationofflourcolorrelatedmutantsM1單穗編號NumbertheM1singlewheatear1831114141617765780總計M2單株數(shù)NumbertheM2singleplant12511221M2單株籽粒NumberofgrainsperM2plant4344246217281082M3單株數(shù)NumbertheM3singleplant422468134986453.3.2TILLING群體相關(guān)突變體的驗證對篩選到的面粉色澤相關(guān)突變體的Psy基因進行克隆測序，并與含Psy基因的小麥－長穗偃麥草抗赤霉病雙體異代換系7el2/7D進行序列比對(圖2)，結(jié)果顯示Psy基因序列完全一致，表明Psy基因并沒有發(fā)生突變，可能還有其他位置的基因影響小麥面粉白度。圖2突變體Psy基因部分序列比對Fig.2PartialsequencealignmentofPsyGeneinmutant3.4類胡蘿卜素含量測定為更直觀表現(xiàn)不同類胡蘿卜素之間含量的差異，對類胡蘿卜素檢測結(jié)果進行了分組統(tǒng)計并繪制了直方圖（圖3）。分析表明，試驗所用材料A079-3的葉黃素含量顯著高于對照組（濟麥22），而其他種類類胡蘿卜素含量與對照組相比無顯著差異。

小麥EMS突變?nèi)后w的創(chuàng)建及功能基因的鑒定301234567圖4Psy基因克隆結(jié)果1：DNAMarker2:JM22Psy基因序列擴增樣品3：7el1Psy基因序列擴增樣品4:7el2Psy基因序列擴增樣品5:7E/7APsy基因序列擴增樣品6:7E/7BPsy基因序列擴增樣品7:7E/7DPsy基因序列擴增樣品Fig.4RT-PCRamplificationofPsyGene1：DNAMarker2:AmplifiedsampleofJM223：Amplifiedsampleof7el14:Amplifiedsampleof7el25:Amplifiedsampleof7E/7A6:Amplifiedsampleof7E/7B7:Amplifiedsampleof7E/7D圖5Psy基因多重序列比對Fig.5PsyGenesequencesfromdifferentwheat-Thinopyrumsubstitutionlines

【參考文獻】：
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本文編號：3313885