突變體的創(chuàng)建與分析是功能基因組學(xué)的重要研究?jī)?nèi)容,為基因功能分析提供了直接的工具材料。創(chuàng)建飽和的基因突變?nèi)后w是分離、鑒定基因功能最直接、最有效的方法之一。長(zhǎng)穗偃麥草Fhb7基因是小麥優(yōu)異的赤霉病抗源,對(duì)Fhb7基因的功能分析將有助于該基因在小麥抗赤霉病育種的有效利用。但Fhb7基因與黃色素合成相關(guān)基因連鎖,使小麥面粉黃色素含量高,對(duì)Fhb7基因的廣泛應(yīng)用具有一定限制。本研究擬利用化學(xué)誘變劑甲基磺酸乙酯（ethyl methane sulfonate,EMS）溶液誘變處理攜帶抗赤霉病Fhb7小麥-長(zhǎng)穗偃麥草易位系材料,初步創(chuàng)建了攜帶抗赤霉病Fhb7易位系突變?nèi)后w,并對(duì)Fhb7基因作了TILLING檢測(cè),同時(shí)篩選到一些面粉色澤相關(guān)突變體,得出的主要結(jié)果如下:1.利用濃度為0.8%EMS溶液處理含F(xiàn)hb7短片段易位系的濟(jì)麥22背景材料,M1代收獲7309單穗,通過單粒傳獲得4473個(gè)M2代單株的群體。2.利用來自M2代群體的約4000個(gè)單株,單株提取DNA,對(duì)目的基因Fhb7進(jìn)行TILLING篩選,直接測(cè)序（Sanger）Fhb7的全長(zhǎng)PCR產(chǎn)物。每個(gè)點(diǎn)突變的純合和雜合利用DNAMAN軟件進(jìn)行... 

【文章來源】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)山東省

【文章頁數(shù)】：55 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

EMS突變體對(duì)Fhb7的功能驗(yàn)證（a）突變體壞死斑的面積統(tǒng)計(jì)（b）離體葉片鑒定表型Fig.1FunctionalverificationofEMSmutanttofhb7

小麥EMS突變?nèi)后w的創(chuàng)建及功能基因的鑒定28表4面粉色澤相關(guān)突變體的繁殖加代Table4PropagationandgenerationofflourcolorrelatedmutantsM1單穗編號(hào)NumbertheM1singlewheatear1831114141617765780總計(jì)M2單株數(shù)NumbertheM2singleplant12511221M2單株籽粒NumberofgrainsperM2plant4344246217281082M3單株數(shù)NumbertheM3singleplant422468134986453.3.2TILLING群體相關(guān)突變體的驗(yàn)證對(duì)篩選到的面粉色澤相關(guān)突變體的Psy基因進(jìn)行克隆測(cè)序，并與含Psy基因的小麥－長(zhǎng)穗偃麥草抗赤霉病雙體異代換系7el2/7D進(jìn)行序列比對(duì)(圖2)，結(jié)果顯示Psy基因序列完全一致，表明Psy基因并沒有發(fā)生突變，可能還有其他位置的基因影響小麥面粉白度。圖2突變體Psy基因部分序列比對(duì)Fig.2PartialsequencealignmentofPsyGeneinmutant3.4類胡蘿卜素含量測(cè)定為更直觀表現(xiàn)不同類胡蘿卜素之間含量的差異，對(duì)類胡蘿卜素檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行了分組統(tǒng)計(jì)并繪制了直方圖（圖3）。分析表明，試驗(yàn)所用材料A079-3的葉黃素含量顯著高于對(duì)照組（濟(jì)麥22），而其他種類類胡蘿卜素含量與對(duì)照組相比無顯著差異。

小麥EMS突變?nèi)后w的創(chuàng)建及功能基因的鑒定301234567圖4Psy基因克隆結(jié)果1：DNAMarker2:JM22Psy基因序列擴(kuò)增樣品3：7el1Psy基因序列擴(kuò)增樣品4:7el2Psy基因序列擴(kuò)增樣品5:7E/7APsy基因序列擴(kuò)增樣品6:7E/7BPsy基因序列擴(kuò)增樣品7:7E/7DPsy基因序列擴(kuò)增樣品Fig.4RT-PCRamplificationofPsyGene1：DNAMarker2:AmplifiedsampleofJM223：Amplifiedsampleof7el14:Amplifiedsampleof7el25:Amplifiedsampleof7E/7A6:Amplifiedsampleof7E/7B7:Amplifiedsampleof7E/7D圖5Psy基因多重序列比對(duì)Fig.5PsyGenesequencesfromdifferentwheat-Thinopyrumsubstitutionlines

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]山東地區(qū)小麥赤霉病發(fā)生原因及化學(xué)防治[J]. 安霞,張海軍,蔣方山,呂連杰,陳軍,牟群,韓明明.  現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技. 2020(03)
[2]我國(guó)小麥赤霉病發(fā)生與控制研究進(jìn)展[J]. 趙娜,杜秀明,李令蕊,楊文香,閆紅飛,劉大群.  河北農(nóng)業(yè)科學(xué). 2020(02)
[3]小麥赤霉病的發(fā)生及綜合防控[J]. 閆向泉,朱偉,孟自力.  現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技. 2019(24)
[4]小麥抗赤霉病鑒定及其抗病基因的檢測(cè)[J]. 徐婷婷,王永軍,狄佳春,孫蘇陽,蔡士賓,汪巧玲,鄒淑瓊,朱銀,楊欣,顏偉.  麥類作物學(xué)報(bào). 2019(11)
[5]EMS誘變技術(shù)在小麥上的應(yīng)用[J]. 曹亞萍,武銀玉,范紹強(qiáng),張鳳琴,連晉,高煒.  激光生物學(xué)報(bào). 2019(05)
[6]小偃麥衍生品系的赤霉病抗性評(píng)價(jià)[J]. 張曉軍,肖進(jìn),王海燕,喬麟軼,李欣,郭慧娟,常利芳,張樹偉,閻曉濤,暢志堅(jiān),武宗信.  作物學(xué)報(bào). 2020(01)
[7]小麥赤霉病的特點(diǎn)及防治方法[J]. 李瑞祥.  種子科技. 2019(08)
[8]小麥赤霉病發(fā)生危害形勢(shì)及防治技術(shù)[J]. 陳英.  鄉(xiāng)村科技. 2019(22)
[9]山東小麥赤霉病發(fā)生特點(diǎn)變化與原因分析[J]. 國(guó)棟,楊久濤,于玲雅,朱軍生,李敏敏,楊萬海,黃渭.  中國(guó)植保導(dǎo)刊. 2019(07)
[10]EMS誘變技術(shù)及其在小麥研究中的應(yīng)用進(jìn)展[J]. 李雪,裴自友,溫輝芹,程天靈,張立生,朱玫,王宏兵.  山西農(nóng)業(yè)科學(xué). 2019(06)

博士論文
[1]面粉顏色相關(guān)性狀分子基礎(chǔ)及關(guān)鍵基因Psy1功能研究[D]. 翟勝男.中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016
[2]長(zhǎng)穗偃麥草抗赤霉病基因Fhb7遺傳圖譜的加密及其標(biāo)記輔助轉(zhuǎn)移[D]. 郭軍.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2015
[3]小麥抗赤霉病相關(guān)基因的克隆及功能分析[D]. 馬信.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014
[4]小麥突變體研究和隱性抗白粉病基因pm2026的精細(xì)定位[D]. 吳坤.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011
[5]基因型、環(huán)境及其互作對(duì)小麥主要品質(zhì)性狀的影響[D]. 喬玉強(qiáng).安徽農(nóng)業(yè)大學(xué) 2008

碩士論文
[1]小麥光溫敏雄性不育系337S不育相關(guān)基因的遺傳轉(zhuǎn)化及功能分析[D]. 姜明珠.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2019
[2]兩個(gè)栽培一粒小麥隱性抗白粉病基因的精確定位[D]. 劉佳佳.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014
[3]普通小麥籽粒黃色素含量相關(guān)基因的克隆與功能標(biāo)記開發(fā)[D]. 董長(zhǎng)海.河北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011
[4]小麥籽粒中脫氧雪腐鐮刀菌烯醇及鐮刀菌菌絲分布研究[D]. 王文龍.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué) 2008



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