發(fā)布時(shí)間：2021-07-31 03:37

　　目的制備由維生素A（VA）修飾的納米載體聚乙二醇（PEG）-聚乙烯亞胺（PEI）,用于靶向肝星狀細(xì)胞（HSC）（LX-2細(xì)胞株）輸送Toll樣受體（TLR）4小干擾RNA（siRNA）。觀察和評(píng)估VA-PEGPEI對LX-2細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率、TLR4/核因子（NF）-κB信號(hào)通路和α-平滑肌肌動(dòng)蛋白（SMA）表達(dá)的影響。方法采用細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒（CCK）-8檢測納米基因藥物細(xì)胞毒性。通過流式細(xì)胞術(shù)和熒光顯微鏡觀察納米藥物轉(zhuǎn)染效率。脂多糖（LPS）刺激LX-2細(xì)胞,并用不同多聚體[VA-PEG-PEI/TLR4 siRNA（siTLR4）或PEG-PEI/siTLR4]進(jìn)行轉(zhuǎn)染。蛋白質(zhì)印跡法（WB）和免疫熒光法分別檢測LX-2細(xì)胞TLR4/NF-κB信號(hào)通路蛋白水平和α-SMA表達(dá)。結(jié)果高濃度（40μg/mL）VA-PEG-PEI/siTLR4孵育下LX-2細(xì)胞仍具有80%以上存活率,表明納米藥物細(xì)胞毒性較低。LPS刺激的LX-2細(xì)胞TLR4/NF-κB信號(hào)通路水平升高,這種作用經(jīng)VA-PEG-PEI/siTLR4處理后顯著減弱。同時(shí),VA-PEG-PEI/siTLR4能有效地使LX-2細(xì)胞失... 

【文章來源】：介入放射學(xué)雜志. 2020,29(10)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：8 頁

【部分圖文】：

納米聚合物VA-PEG-PEI合成線路

最終合成的聚合物VA-PEG-PEI通過核磁共振氫譜表征，其1H波譜圖見圖2。其中5.37 ppm峰（a）為VA雙鍵基團(tuán)質(zhì)子特征峰，3.6 ppm附近的峰（b）為PEG特征峰，1.8 ppm和1.2 ppm峰為PEI特征基團(tuán)，而7.3 ppm峰為氘代氯仿的溶劑峰，以三甲基硅烷（TMS）為內(nèi)標(biāo)（0 ppm）。所合成的聚合物VA-PEG-PEI在其每一個(gè)嵌段部分均有標(biāo)志性特征峰，證明該聚合物成功合成。納米粒徑分析儀檢測不同N/P比時(shí)VA-PEG-PEI/SCR粒徑分布和Zeta電位結(jié)果顯示，隨著N/P比逐漸增加，復(fù)合物粒徑逐漸縮小，N/P比增大至8時(shí)粒徑達(dá)最�。�125.0±3.2) nm，而后趨于穩(wěn)定；Zeta電位隨N/P比增大逐漸增高，N/P比為8時(shí)Zeta電位為（10.2±1.0) m V，見圖3。因此，N/P比為8時(shí)，復(fù)合物具有合適粒徑和弱正電位，有利于細(xì)胞攝取、吸收，適合進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

瓊脂糖凝膠阻滯電泳試驗(yàn)結(jié)果顯示，隨著N/P比逐漸增大，si RNA條帶逐漸減弱，直至消失；VA-PEG-PEI組、PEG-PEI組N/P比分別為≥8、≥6時(shí)，si RNA條帶完全消失，說明在si RNA完全被載體復(fù)合；其中VA靶向修飾后PEG-PEI復(fù)合si RNA能力較未修飾PEG-PEI稍有減弱，但仍有良好的si RNA負(fù)載能力，見圖4。圖4 納米復(fù)合物在不同N/P比凝膠阻滯電泳試驗(yàn)結(jié)果


本文編號(hào)：3312690