發(fā)布時間：2021-07-29 22:30

　　茶炭疽病是茶樹上的葉部病害之一,在茶樹上發(fā)生嚴(yán)重時會導(dǎo)致茶葉品質(zhì)和質(zhì)量的下降,造成一定的經(jīng)濟損失。本研究以根癌農(nóng)桿菌GFP基因表達載體質(zhì)粒EGFP-PSK2251和一株茶膠孢炭疽菌（GZCC20-0218）為材料,通過根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化的方法,構(gòu)建茶膠孢炭疽菌的遺傳轉(zhuǎn)化體系,篩選獲得穩(wěn)定遺傳的轉(zhuǎn)化子。利用熒光顯微鏡技術(shù)揭示轉(zhuǎn)化子在葉片組織內(nèi)定殖的特點。研究結(jié)果表明:根癌農(nóng)桿菌與茶膠孢炭疽菌的分生孢子在26℃,0.2 mol/L乙酰丁香酮（AS）誘導(dǎo)下得到轉(zhuǎn)化子。對轉(zhuǎn)化子進行綠色熒光檢測、分子驗證及遺傳穩(wěn)定性測定后,從而獲得穩(wěn)定遺傳的綠色熒光蛋白（GFP）標(biāo)記菌株。同時,試驗表明GFP標(biāo)記菌株仍具有致病性。GFP標(biāo)記菌株進行茶葉侵染試驗時,7 d后茶葉發(fā)病率達到100%。發(fā)病葉片進行組織切片觀察,發(fā)現(xiàn)膠孢炭疽菌的分生孢子可以在葉片的氣孔和葉片組織內(nèi)定殖。 

【文章來源】：基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué). 2020,39(08)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：9 頁

【部分圖文】：

GFP菌的分生孢子液接種茶苗后的處理部位

本實驗所用的根癌農(nóng)桿菌中含有的質(zhì)粒EGFP-PSK2251同時攜帶GFP基因、潮霉素B抗性基因(潮霉素磷酸轉(zhuǎn)移酶基因)及卡那霉素抗性基因，通過PCR擴增驗證質(zhì)粒中的潮霉素B抗性基因，從而證明綠色熒光蛋白基因的存在。試驗結(jié)果表明：凝膠電泳條帶在750 bp左右(圖2)，與預(yù)期的目的條帶一致，質(zhì)粒中潮霉素B抗性基因穩(wěn)定的存在根癌農(nóng)桿菌中，同時說明熒光蛋白基因也穩(wěn)定的存在根癌農(nóng)桿菌中。1.3 膠孢炭疽菌對Hyg B的敏感度分析

熒光顯微鏡下觀察到轉(zhuǎn)化子的菌絲及其產(chǎn)生的分生孢子均能發(fā)出較強的綠色熒光(圖4)，將其保存?zhèn)溆谩D3 不同濃度潮霉素B對GZCC20-0218的生長抑制情況


本文編號：3310178