目的:在男性癌癥中前列腺癌發(fā)病頻率排第二,致死率排第六。近些年通過(guò)大量測(cè)序工作篩選到了多個(gè)與前列腺癌診斷和治療相關(guān)的生物分子標(biāo)志物。對(duì)這些分子標(biāo)志物的充分研究和認(rèn)定將推動(dòng)它們?cè)诎┌Y診斷治療中的準(zhǔn)確應(yīng)用。有報(bào)道顯示由前列腺上皮產(chǎn)生的血管收縮肽內(nèi)皮素-1（Endothelin-1,ET-1）可能在前列腺癌的進(jìn)展中起著重要作用。Beclin1調(diào)控自噬激活分子1蛋白（Activating Molecule in Beclin 1-Regulated Autophagy 1,Ambra 1）,這一新型 ATG 基因在 PCa細(xì)胞中對(duì)順鉑的敏感性有很強(qiáng)的調(diào)節(jié)作用。本研究主要探討ET-1在前列腺癌的進(jìn)展中的作用以及Ambra1在前列腺癌中通過(guò)介導(dǎo)自噬影響化療敏感性。方法:使用Western印跡來(lái)證實(shí)了在前列腺癌細(xì)胞系（LNCap細(xì)胞系,PC3細(xì)胞系和DU145細(xì)胞系）中ET-1的表達(dá)情況。此外,我們利用siRNA敲低了人前列腺癌細(xì)胞系中ET-1基因的表達(dá),ET-1基因在人前列腺癌細(xì)胞系中影響細(xì)胞增殖、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞周期和細(xì)胞侵襲、遷移的全過(guò)程。采用Western blot、細(xì)胞凋亡、caspase ... 

【文章來(lái)源】：武漢大學(xué)湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：98 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖１?Ｗｅｓｔｅｒｎ印跡分析ＬＮＣａｐ細(xì)胞系，ＰＣ３細(xì)胞系和ＤＵ１４５細(xì)胞系中ＥＴ－１蛋白表達(dá)??＊代表與對(duì)照相比顯著性差異（Ｐ＜０．０５，?Ｔ檢驗(yàn)）??１．３．２前列腺癌細(xì)胞ＰＣ３細(xì)胞系中ＥＴ－１敲低體系的建立??

為了下調(diào)ＰＣ－３細(xì)胞中的ＥＴ－１表達(dá)，我們?cè)O(shè)計(jì)了針對(duì)ＥＴ－１的ｓｉＲＮＡ。使用??ＥＴ－１?ｓｉＲＮＡ轉(zhuǎn)染ＰＣ３細(xì)胞后進(jìn)行Ｗｅｓｔｅｒｎ印跡分析檢測(cè)了?ＥＴ－１敲低后的表達(dá)量。??結(jié)果表明，ＥＴ－ｌｓｉＲＮＡ能有效降低ＥＴ－１的表達(dá)（圖２Ａ和２Ｂ）。進(jìn)一步，灰色??值分析也證實(shí)了實(shí)驗(yàn)組的ＥＴ＿１蛋白表達(dá)與對(duì)照組和空白組相比有顯著性差異??（圖２Ｂ）。因此，此后ＥＴ－ｌｓｉＲＮＡ被用于所有后續(xù)實(shí)驗(yàn)。??ｔ??１４??

焚光活化細(xì)胞分選儀（Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ?Ａｃｔｉｖａｔｅｄ?Ｃｅｌｌ?Ｓｏｒｔｅｒ，ＦＡＣＳ）結(jié)果表明，在??ＰＣ３細(xì)胞中敲低ＥＴ－１會(huì)引起Ｇ１和Ｇ２期細(xì)胞比例的上升（圖４Ａ），而ＥＴ－１敲??低導(dǎo)致的Ｇ１期細(xì)胞比例上升與轉(zhuǎn)染４８小時(shí)的細(xì)胞數(shù)減少（圖３），表明了細(xì)胞??停滯在了?Ｇ１?／Ｇ２檢查點(diǎn)（ｃｈｅｃｋｐｏｉｎｔ）上。與兩個(gè)對(duì)照組相比，ＥＴ－１敲低的ＰＣ３??細(xì)胞增殖被顯著抑制長(zhǎng)達(dá)４８小時(shí)。上述結(jié)果表明，ＥＴ－１敲除能通過(guò)阻止Ｇｌ?／?Ｇ２??細(xì)胞周期進(jìn)程可以有效地抑制ＰＣ３細(xì)胞的細(xì)胞增殖。此外，與兩個(gè)對(duì)照組相比，??ＥＴ－１?ｓｉＲＮＡ能導(dǎo)致凋亡細(xì)胞比例的顯著增加，表明敲低ＥＴ－１可以促進(jìn)凋亡的發(fā)??生（圖４Ｂ）。??１６??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]前列腺癌中內(nèi)皮素及其受體的研究進(jìn)展[J]. 王青兵,渠武帥,秦大山,王志平.  中華男科學(xué)雜志. 2006(05)



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