目的:在男性癌癥中前列腺癌發(fā)病頻率排第二,致死率排第六。近些年通過大量測序工作篩選到了多個與前列腺癌診斷和治療相關的生物分子標志物。對這些分子標志物的充分研究和認定將推動它們在癌癥診斷治療中的準確應用。有報道顯示由前列腺上皮產(chǎn)生的血管收縮肽內(nèi)皮素-1（Endothelin-1,ET-1）可能在前列腺癌的進展中起著重要作用。Beclin1調(diào)控自噬激活分子1蛋白（Activating Molecule in Beclin 1-Regulated Autophagy 1,Ambra 1）,這一新型 ATG 基因在 PCa細胞中對順鉑的敏感性有很強的調(diào)節(jié)作用。本研究主要探討ET-1在前列腺癌的進展中的作用以及Ambra1在前列腺癌中通過介導自噬影響化療敏感性。方法:使用Western印跡來證實了在前列腺癌細胞系（LNCap細胞系,PC3細胞系和DU145細胞系）中ET-1的表達情況。此外,我們利用siRNA敲低了人前列腺癌細胞系中ET-1基因的表達,ET-1基因在人前列腺癌細胞系中影響細胞增殖、細胞凋亡、細胞周期和細胞侵襲、遷移的全過程。采用Western blot、細胞凋亡、caspase ... 

【文章來源】：武漢大學湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：98 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１?Ｗｅｓｔｅｒｎ印跡分析ＬＮＣａｐ細胞系，ＰＣ３細胞系和ＤＵ１４５細胞系中ＥＴ－１蛋白表達??＊代表與對照相比顯著性差異（Ｐ＜０．０５，?Ｔ檢驗）??１．３．２前列腺癌細胞ＰＣ３細胞系中ＥＴ－１敲低體系的建立??

為了下調(diào)ＰＣ－３細胞中的ＥＴ－１表達，我們設計了針對ＥＴ－１的ｓｉＲＮＡ。使用??ＥＴ－１?ｓｉＲＮＡ轉染ＰＣ３細胞后進行Ｗｅｓｔｅｒｎ印跡分析檢測了?ＥＴ－１敲低后的表達量。??結果表明，ＥＴ－ｌｓｉＲＮＡ能有效降低ＥＴ－１的表達（圖２Ａ和２Ｂ）。進一步，灰色??值分析也證實了實驗組的ＥＴ＿１蛋白表達與對照組和空白組相比有顯著性差異??（圖２Ｂ）。因此，此后ＥＴ－ｌｓｉＲＮＡ被用于所有后續(xù)實驗。??ｔ??１４??

焚光活化細胞分選儀（Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ?Ａｃｔｉｖａｔｅｄ?Ｃｅｌｌ?Ｓｏｒｔｅｒ，ＦＡＣＳ）結果表明，在??ＰＣ３細胞中敲低ＥＴ－１會引起Ｇ１和Ｇ２期細胞比例的上升（圖４Ａ），而ＥＴ－１敲??低導致的Ｇ１期細胞比例上升與轉染４８小時的細胞數(shù)減少（圖３），表明了細胞??停滯在了?Ｇ１?／Ｇ２檢查點（ｃｈｅｃｋｐｏｉｎｔ）上。與兩個對照組相比，ＥＴ－１敲低的ＰＣ３??細胞增殖被顯著抑制長達４８小時。上述結果表明，ＥＴ－１敲除能通過阻止Ｇｌ?／?Ｇ２??細胞周期進程可以有效地抑制ＰＣ３細胞的細胞增殖。此外，與兩個對照組相比，??ＥＴ－１?ｓｉＲＮＡ能導致凋亡細胞比例的顯著增加，表明敲低ＥＴ－１可以促進凋亡的發(fā)??生（圖４Ｂ）。??１６??

【參考文獻】：
期刊論文
[1]前列腺癌中內(nèi)皮素及其受體的研究進展[J]. 王青兵,渠武帥,秦大山,王志平.  中華男科學雜志. 2006(05)



本文編號：3298178