紫花苜蓿是我國重要的多年生的豆科植物,其具有高產(chǎn)、營養(yǎng)成分多樣化及抗逆性強(qiáng)的特點(diǎn),但惡化的土地條件仍限制了苜蓿的產(chǎn)量。多個(gè)研究表明RCI2/PMP3類基因作為多基因家族普遍存在于植物中,可響應(yīng)多種非生物脅迫,包括低溫、干旱、鹽,且被激素誘導(dǎo)。且多個(gè)研究表明RCI2/PMP3基因在植物中的超量表達(dá)可通過提高膜的穩(wěn)定性及保持細(xì)胞內(nèi)的離子平衡來增加抗多種非生物脅迫的耐力。關(guān)于RCI2類基因在苜蓿中的超量表達(dá)是否可以提高苜�？狗巧锩{迫的能力仍是未知的。本研究從紫花苜蓿中克隆了MsRCI2A,MsRCI2B和MsRCI2C基因,構(gòu)建了三個(gè)植物表達(dá)載體以連接目的基因。通過根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化方法轉(zhuǎn)化紫花苜蓿子葉節(jié),并通過分子生物學(xué)技術(shù)對所篩選的抗性植株進(jìn)行檢測。分析了MsRCI2A、MsRCI2B、MsRCI2C基因超量表達(dá)對苜蓿耐堿性的影響,為培育出耐逆性轉(zhuǎn)基因苜蓿提供重要的理論依據(jù)以及為促進(jìn)畜牧業(yè)的蓬勃發(fā)展奠定基礎(chǔ)。本研究的主要研究結(jié)果如下:1.在紫花苜蓿中克隆了RCI2類基因家族成員MsRCI2A、MsRCI2B、MsRCI2C基因,蛋白質(zhì)分子質(zhì)量分別為5.931-kDa、5.946-... 

【文章來源】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：77 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

本實(shí)驗(yàn)技術(shù)路線圖

圖 2-1 蒺藜苜蓿中 RCI2 類基因在鹽脅迫下的表達(dá)Fig. 2-1 Expression of RCI2 Genes in Alfalfa under Salt StresA、MsRCI2B、MsRCI2C基因在非生物脅迫下脅迫處理紫花苜蓿紫花苜�！埬� 806’種子，放在鋪有濕潤濾紙的平皿中，每子上方蓋上濕潤濾紙，將平皿放在光照培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)，溫 16 h 光照，8 h 黑暗。每天觀察，給予適當(dāng)?shù)乃�，待幼芽長到，澆灌所需營養(yǎng)液為 1/4 Hoagland。16 天后轉(zhuǎn)移至 1/4 Hoaglan更換一次營養(yǎng)液，溫度及光照條件與上一致，待其水培適應(yīng) 且長勢一致的幼苗進(jìn)行非生物脅迫處理。取材方法為每個(gè)時(shí)間復(fù)，分別取紫花苜蓿幼苗的根和葉片各 200 mg，標(biāo)記后迅速放下：理所用濃度為 100 μM，取材時(shí)間點(diǎn)為處理前及脅迫處理后的 。

葉中的表達(dá)變化；圖 B 為處理后各基因在根中的表ression changes of the genes in the leaves after treatmnes in the roots after treatment.NaHCO3處理下不同時(shí)間的紫花苜蓿 RCI2 基expression of the Alfalfa RCI2 genes under diff200 mM NaHCO3treatmentsRCI2B、MsRCI2C基因的克隆及sRCI2B、MsRCI2C基因的克隆結(jié)O3堿脅迫處理 48 h 時(shí)的紫花苜蓿幼苗根部的完整度，如圖 3-5 顯示，所提取的總 RNA 質(zhì)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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本文編號：3289969