為分析多花黃精塊莖中甾體皂苷生物合成通路基因的表達(dá),篩選出塊莖不同發(fā)育期以及在脅迫條件下穩(wěn)定表達(dá)的內(nèi)參基因至關(guān)重要。根據(jù)業(yè)已建立的多花黃精轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫和相關(guān)報道的植物內(nèi)參基因,以不同發(fā)育期和茉莉酸甲酯（methyl jasmonate, MeJA）處理后的多花黃精塊莖為實驗材料,利用實時熒光定量PCR（qPCR）技術(shù),對8個候選內(nèi)參基因包括histone H2A（H2A2）,glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase（GAPDH）,ACTIN,β-tubulin,ubiquitin-conjugating enzyme E2 10（UBQ-E2-10）,elongation factor 1-alpha isoform（EF-1α2）,18S rRNA（18S）,α-tubulin 4進行系統(tǒng)的篩選;利用GeNorm,NormFinder,BestKeeper 3個統(tǒng)計學(xué)軟件對內(nèi)參基因的穩(wěn)定性進行分析;通過分析甾體皂苷生物合成通路中4個基因的表達(dá),對內(nèi)參基因的可靠性進行驗證。結(jié)果顯示,以UBQ-E2-10作為內(nèi)參基因時,4個甾體皂苷合成相關(guān)基因在不... 

【文章來源】：中國中藥雜志. 2020,45(24)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：9 頁

【部分圖文】：

8個候選內(nèi)參基因的qPCR溶解曲線

GeNorm通過計算各候選內(nèi)參基因在不同組織中的表達(dá)穩(wěn)定值(expression stability value, M)來衡量其表達(dá)穩(wěn)定性。該軟件以M=1.5為閾值,M越小,穩(wěn)定性越高,越適合作為內(nèi)參基因,當(dāng)M>1.5時則說明其不適于作為內(nèi)參基因。此外,GeNorm通過計算配對變異值(pairwise variation value, V)來確定最適宜的內(nèi)參基因個數(shù),以獲得準(zhǔn)確可靠的結(jié)果。該程序以0.15為閾值,當(dāng)Vn/n+1<0.15時,則n個內(nèi)參基因就可以滿足校正目的基因表達(dá)量的要求。8個候選內(nèi)參基因在多花黃精塊莖不同發(fā)育期的M均小于1.5,排列次序為:ACTIN>β-tubulin>H2A2>GADPH>α-tubulin 4>18S rRNA>EF-1α2>UBQ-E2-10。以ACTIN最大,為0.456,EF-1α2和UBQ-E2-10最小,均為0.303(圖3A);V2/3為0.119<0.15,表明最適合內(nèi)參基因個數(shù)為2(圖3B)。由此說明,EF-1α2和UBQ-E2-10為多花黃精塊莖不同發(fā)育期的最合適內(nèi)參基因。受MeJA脅迫處理后,8個內(nèi)參基因在多花黃精塊莖中的M均小于1.5,排列次序為:GADPH>β-tubulin>H2A2>EF-1α2>18S rRNA>ACTIN>α-tubulin 4>UBQ-E2-10。以GADPH最大,為0.82;α-tubulin 4和UBQ-E2-10最小,均為0.46(圖3C);V2/3為0.125<0.15,表明最適合內(nèi)參基因個數(shù)為2(圖3D)。由此說明,α-tubulin 4,UBQ-E2-10為多花黃精MeJA脅迫處理的最合適內(nèi)參基因。

受MeJA脅迫處理后,8個內(nèi)參基因在多花黃精塊莖中的M均小于1.5,排列次序為:GADPH>β-tubulin>H2A2>EF-1α2>18S rRNA>ACTIN>α-tubulin 4>UBQ-E2-10。以GADPH最大,為0.82;α-tubulin 4和UBQ-E2-10最小,均為0.46(圖3C);V2/3為0.125<0.15,表明最適合內(nèi)參基因個數(shù)為2(圖3D)。由此說明,α-tubulin 4,UBQ-E2-10為多花黃精MeJA脅迫處理的最合適內(nèi)參基因。2.3.2 NormFinder分析

【參考文獻】：
期刊論文
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