發(fā)布時(shí)間：2021-07-12 21:18

　　為分析多花黃精塊莖中甾體皂苷生物合成通路基因的表達(dá),篩選出塊莖不同發(fā)育期以及在脅迫條件下穩(wěn)定表達(dá)的內(nèi)參基因至關(guān)重要。根據(jù)業(yè)已建立的多花黃精轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫(kù)和相關(guān)報(bào)道的植物內(nèi)參基因,以不同發(fā)育期和茉莉酸甲酯（methyl jasmonate, MeJA）處理后的多花黃精塊莖為實(shí)驗(yàn)材料,利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qPCR）技術(shù),對(duì)8個(gè)候選內(nèi)參基因包括histone H2A（H2A2）,glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase（GAPDH）,ACTIN,β-tubulin,ubiquitin-conjugating enzyme E2 10（UBQ-E2-10）,elongation factor 1-alpha isoform（EF-1α2）,18S rRNA（18S）,α-tubulin 4進(jìn)行系統(tǒng)的篩選;利用GeNorm,NormFinder,BestKeeper 3個(gè)統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)內(nèi)參基因的穩(wěn)定性進(jìn)行分析;通過(guò)分析甾體皂苷生物合成通路中4個(gè)基因的表達(dá),對(duì)內(nèi)參基因的可靠性進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果顯示,以UBQ-E2-10作為內(nèi)參基因時(shí),4個(gè)甾體皂苷合成相關(guān)基因在不... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)中藥雜志. 2020,45(24)北大核心CSCD

【文章頁(yè)數(shù)】：9 頁(yè)

【部分圖文】：

8個(gè)候選內(nèi)參基因的qPCR溶解曲線

GeNorm通過(guò)計(jì)算各候選內(nèi)參基因在不同組織中的表達(dá)穩(wěn)定值(expression stability value, M)來(lái)衡量其表達(dá)穩(wěn)定性。該軟件以M=1.5為閾值,M越小,穩(wěn)定性越高,越適合作為內(nèi)參基因,當(dāng)M>1.5時(shí)則說(shuō)明其不適于作為內(nèi)參基因。此外,GeNorm通過(guò)計(jì)算配對(duì)變異值(pairwise variation value, V)來(lái)確定最適宜的內(nèi)參基因個(gè)數(shù),以獲得準(zhǔn)確可靠的結(jié)果。該程序以0.15為閾值,當(dāng)Vn/n+1<0.15時(shí),則n個(gè)內(nèi)參基因就可以滿足校正目的基因表達(dá)量的要求。8個(gè)候選內(nèi)參基因在多花黃精塊莖不同發(fā)育期的M均小于1.5,排列次序?yàn)?ACTIN>β-tubulin>H2A2>GADPH>α-tubulin 4>18S rRNA>EF-1α2>UBQ-E2-10。以ACTIN最大,為0.456,EF-1α2和UBQ-E2-10最小,均為0.303(圖3A);V2/3為0.119<0.15,表明最適合內(nèi)參基因個(gè)數(shù)為2(圖3B)。由此說(shuō)明,EF-1α2和UBQ-E2-10為多花黃精塊莖不同發(fā)育期的最合適內(nèi)參基因。受MeJA脅迫處理后,8個(gè)內(nèi)參基因在多花黃精塊莖中的M均小于1.5,排列次序?yàn)?GADPH>β-tubulin>H2A2>EF-1α2>18S rRNA>ACTIN>α-tubulin 4>UBQ-E2-10。以GADPH最大,為0.82;α-tubulin 4和UBQ-E2-10最小,均為0.46(圖3C);V2/3為0.125<0.15,表明最適合內(nèi)參基因個(gè)數(shù)為2(圖3D)。由此說(shuō)明,α-tubulin 4,UBQ-E2-10為多花黃精MeJA脅迫處理的最合適內(nèi)參基因。

受MeJA脅迫處理后,8個(gè)內(nèi)參基因在多花黃精塊莖中的M均小于1.5,排列次序?yàn)?GADPH>β-tubulin>H2A2>EF-1α2>18S rRNA>ACTIN>α-tubulin 4>UBQ-E2-10。以GADPH最大,為0.82;α-tubulin 4和UBQ-E2-10最小,均為0.46(圖3C);V2/3為0.125<0.15,表明最適合內(nèi)參基因個(gè)數(shù)為2(圖3D)。由此說(shuō)明,α-tubulin 4,UBQ-E2-10為多花黃精MeJA脅迫處理的最合適內(nèi)參基因。2.3.2 NormFinder分析

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]多花黃精甾體皂苷生物合成途徑分析及關(guān)鍵酶基因研究[J]. 單春苗,王晨凱,施圓圓,張聲祥,趙歷強(qiáng),吳家文.  中國(guó)中藥雜志. 2020(12)
[2]巴戟天實(shí)時(shí)熒光定量PCR內(nèi)參基因的選擇[J]. 葉友杰,謝德金,楊德明,黃霞,陳禮光,榮俊冬,鄭郁善.  中草藥. 2020(04)
[3]多花黃精根莖的轉(zhuǎn)錄組分析與甾體皂苷生物合成相關(guān)基因發(fā)掘[J]. 廖榮俊,楊陽(yáng),葉碧歡,李楠,陳友吾,翁永發(fā),杜國(guó)堅(jiān),李海波.  中國(guó)中藥雜志. 2020(07)
[4]栽培遠(yuǎn)志qRT-PCR內(nèi)參基因篩選與P450s基因的時(shí)空表達(dá)分析[J]. 李娟,孔冉冉,梅月菊,張福生,田洪嶺,秦雪梅,杜晨暉,馬存根.  中草藥. 2019(24)
[5]基于多花黃精轉(zhuǎn)錄組的多糖及薯蕷皂苷生物合成路徑研究[J]. 祝明珠,俞年軍,王秋麗,周安,顧曉,韓榮春,童小慧,彭代銀.  中國(guó)中藥雜志. 2020(01)
[6]黃精屬植物化學(xué)成分及藥理活性研究進(jìn)展[J]. 張嬌,王元忠,楊維澤,楊美權(quán),張金渝.  中國(guó)中藥雜志. 2019(10)
[7]千里光qRT-PCR分析中內(nèi)參基因的選擇[J]. 王麗平,梁瑾,諶琴琴,王強(qiáng).  中國(guó)中藥雜志. 2019(03)
[8]不同生長(zhǎng)年限林下山參實(shí)時(shí)熒光定量PCR內(nèi)參基因的篩選[J]. 荊禮,麻銳,劉星彤,蘇航,潘黛安,王秀閣,張鶴,齊濱.  時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥. 2018(11)
[9]川續(xù)斷根實(shí)時(shí)熒光定量PCR內(nèi)參基因的篩選[J]. 晉海軍,王海霞,劉紹紅,張濤,向守艷.  分子植物育種. 2018(24)
[10]朱頂紅實(shí)時(shí)熒光定量PCR中不同組織器官內(nèi)參基因的篩選[J]. 劉曉婷,王順利,薛璟祺,薛玉前,呂英民,張秀新.  園藝學(xué)報(bào). 2018(05)



本文編號(hào)：3280678