電壓依賴性陰離子通道（voltage-dependent anion channel,VDAC）廣泛存在于各種真核生物中,是一類孔蛋白,通過電壓的變化來調(diào)節(jié)物質(zhì)的運(yùn)輸。前期本實(shí)驗(yàn)室已鑒定水稻基因組含8種vdac基因,并且研究得知OsVDAC3超表達(dá)的YTB植株相較于野生型對(duì)耐寒及耐鹽性有一定的敏感性,同時(shí)得到了一批OsVDAC3超表達(dá)的YTB的種子。本實(shí)驗(yàn)期望通過對(duì)這批材料的鑒定,排除受到基因污染和分離的種子獲得符合條件的陽性植株便于下一步的研究,同時(shí)對(duì)OsVDAC1進(jìn)行了原核表達(dá)載體的構(gòu)建,取得了如下結(jié)果:1.對(duì)得到的OsVDAC3超表達(dá)的YTB的種子進(jìn)行培養(yǎng),提取基因組DNA后篩選Hyg陽性的植株。在陽性植株篩選出不含Rf5和Rf6基因的植株。再通過OrfH79以及Orf216的鑒定來判斷其受體是YTA還是YTB。經(jīng)過篩選和復(fù)查,鑒定出了幾十株符合條件的OsVDAC3轉(zhuǎn)YTB植株,未鑒定出OsVDAC3轉(zhuǎn)YTA植株。2.對(duì)OsVDAC1的生物信息學(xué)分析表明其ORF序列大小為825bp,編碼274個(gè)氨基酸殘基。從日本晴cDNA擴(kuò)增得到OsVDAC1的ORF,成功構(gòu)建了重組質(zhì)粒pET-... 

【文章來源】：中南民族大學(xué)湖北省

【文章頁數(shù)】：46 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

VDAC1蛋白三維結(jié)構(gòu)示意圖(Tarasovaetal.,2016)

圖 2 VDAC 控制細(xì)胞色素 C 釋放的機(jī)制 2 VDAC-dependent mechanism of cytochrome c release(Tsujimoto eVDAC 表達(dá)水平的改變也會(huì)影響線粒體的功能 (Abu-Ham; Zweckstetter, 2010)。 研究發(fā)現(xiàn)，使用 siRNA 干擾 VDAC的 PTP 以及內(nèi)皮細(xì)胞凋亡會(huì)隨著 VDAC 表達(dá)量的減eddine e al., 2008; Yuan et al., 2008)；使用順鉑誘導(dǎo) Cyt C子(AIF)釋放，RNA 干擾后，VDAC 表達(dá)量的降低也會(huì)對(duì)；Bax 的活化和胱天蛋白酶 3 的成熟等，會(huì)因?yàn)楦蓴_而抑其過表達(dá)會(huì)使線粒體內(nèi)膜去極化(Zweckstetter, 2010)。機(jī)制朗，目前有研究表明可能是因?yàn)?VDAC 超表達(dá)通過降低電聚體或與 ANT 相互作用等機(jī)制改變了通透性(Zweckstetteo et al., 2010)。有最新的研究表明，阿司匹林觸發(fā)癌細(xì)胞凋癌效應(yīng)的機(jī)制很有可能就與其調(diào)節(jié) VDAC 的構(gòu)象有關(guān)(Tew)。

圖 2.1 部分轉(zhuǎn)基因植株的 Hyg 檢測(cè)泳道 1-16：不同植株的 Hyg PCR 擴(kuò)增Fig2.1 Identification of Hyg by PCR in some transgenic plantsLane1-16：T h e a m p l i f i c a t i o n o f H y g o f d i f f e r e n t p l a n t s b y P C R圖 2.2 部分轉(zhuǎn)基因植株的 Rf5 檢測(cè)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]水稻基因OsVDAC3的逆境功能分析[J]. 胡穎,王春臺(tái),覃永華.  華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 2015(06)
[2]電壓依賴性陰離子通道VDAC3參與擬南芥先天免疫[J]. 王程程,杜秋麗,伍粲,郭葳,邱金龍.  植物病理學(xué)報(bào). 2015(04)
[3]AtVDAC2參與擬南芥鹽脅迫信號(hào)應(yīng)答過程[J]. 文國(guó)琴,劉志斌,李旭鋒,王健美,楊毅.  四川大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2012(04)
[4]植物的超敏性細(xì)胞死亡研究初探[J]. 范文艷.  黑龍江農(nóng)業(yè)科學(xué). 2005(02)

碩士論文
[1]水稻vdac、ant及HL-sp1基因的表達(dá)研究[D]. 羅鳳燕.中南民族大學(xué) 2010



本文編號(hào)：3275860