發(fā)布時間：2021-07-10 09:18

　　青桿（Picea wilsonii）又稱魏氏云杉或華北云杉,屬于松科云杉屬植物,是我國特有的常綠針葉樹種,也是重要的園林綠化樹種及用材林樹種,具有極高的生態(tài)價值。隨著全球環(huán)境的惡化,干旱已經(jīng)成為全球范圍內(nèi)影響生態(tài)平衡及農(nóng)林業(yè)生產(chǎn)的主要環(huán)境因素之一,青桿的生存環(huán)境也隨之受到威脅,其分布范圍正在逐年減少,因此闡明其抗逆機制,挖掘其自身抗逆基因至關(guān)重要。本研究以青桿為試驗材料,利用NCBI網(wǎng)站的Protein BLAST功能及RT-qPCR手從青桿轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)中篩選出響應(yīng)干旱脅迫的目的基因。通過逆境和激素處理下目的基因的表達量分析、組織特異性分析、染色體步移、酵母雙雜交、亞細胞定位及轉(zhuǎn)基因等試驗對目的基因的耐旱性進行了深入研究和驗證。主要研究結(jié)果如下:1.本研究從青桿轉(zhuǎn)錄組中篩選出5個響應(yīng)干旱脅迫的基因,分別為PwPEBP、PwMBF1c、PwRhomboid（RBL）、PwWD40和PwREF。對其進行組織特異性及逆境和激素處理下的表達量分析,結(jié)果表明,5個基因均在青桿成熟針葉中表達量最高;在逆境和激素處理中,5個基因均對干旱脅迫有強烈響應(yīng),在ABA誘導(dǎo)下,基因表達量明顯上升或下降;除了響應(yīng)... 

【文章來源】：北京林業(yè)大學(xué)北京市 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：95 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖３－１青桿耐旱基因的ＲＴ－ｑＰＣＲ篩選結(jié)果??Ｆｉｇｕｒｅ?３－１?Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ?ｒｅｓｕｌｔ?ｏ?

＊??０?ｃ?—，?了??拍昏ｉ?〇?ｉ?ｃ?ｉ．〇?」?下?一ｒ?４＇??ｆ?ｚ?ｎ??ＩＩ?５?５?２?ｏｃ??？?２?Ｃｄ?ｄ??０．０?—?????????０．０???????????０?Ｊ￣￣１１￣１＝１￣＾?Ｖ?Ｊ￣－ｚ?１￣￣１—??°?３?６?１２?０?３?６?１２?ＡＡ?令翁令??處理時間?處理時間?組織％??Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ?ｔｉｍｅ／ｈ?Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ?ｔｉｍｅ＾ｉ?Ｔｉｓｓｔｕｅ??圖３－４?Ｐｈ７？￡Ｆ在不同逆境下與各組織中的表達量分析??Ｆｉｇｕｒｅ?３－４?Ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｏｆ?ＰｗＲＥＦ?ｉｎ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｔｉｓｓｕｅｓ?ｕｎｄｅｒ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｓｔｒｅｓｓｅｓ??３．２青桿基因表達分析與功能驗證??３．２．１?ＰｗＲｈｏｍｂｏｉｄ生物信息學(xué)分析??對青桿中的該蛋內(nèi)進行結(jié)構(gòu)域分析，發(fā)現(xiàn)具有－個Ｒｈｏｍｂｏｉｄ超家族結(jié)構(gòu)域，所??以將其命名為?／Ｖ／？／ｗｗ／ｗｚＷ?（圖?３－５Ａ），ｃＤＮＡ?全長為?２３８７?ｂｐ，其開放??閱讀框（ＯＲＦ）共１１９１?ｂｐ，共編碼３９６個氨基酸。生物信息學(xué)Ｎ站對其預(yù)測分析，??結(jié)果顯不ＰｗＲｈｏｍｂｏｉｄ蛋白分子式為Ｃ１９８８Ｈ３１１８Ｎ５２８Ｏ５４１Ｓ２４．相對分子質(zhì)量為４３．８ｋＤａ，??理論ｐｉ值為８．８９，其正電殘基精氨酸（Ａｒｇ）與賴氨酸（Ｌｙｓ）總數(shù)為３３，負電殘基??天冬氨酸（Ａｓｐ）與谷氨酸（Ｇｌｕ）總數(shù)為２４。該蛋白中亮氨酸（Ｌｅｕ）含量最高，為??１２．６％，不穩(wěn)定指數(shù)為４３．２１，高于４０，預(yù)測該蛋白不穩(wěn)定

結(jié)果與分析??組織中的表達分析顯示，在成熟葉中表達量最高，為對照的７．４倍，其次是在花粉中，??達到對照的３．８倍，在種子也有一定的表達，表達量是對照的１．６倍，??在莖中的表達量最低，僅為對照的０．４倍（圖３－８１）。綜上所述，該基因?qū)Ω珊�、�??溫、ＡＢＡ及ＳＡ誘導(dǎo)有強烈響應(yīng)。??Ａ?ｇ?Ｃ??５５?干？（ＤｒｏｕｇｂＯ?＊?５?低溫（４〇Ｃ＞?＊?（４２°Ｃ）?？??Ｉ３０＇?ｒｈ?２。：??Ｓ?ｈ〇?３?．?丁?１５；?ｂ?ｂ??靈�。海�?：ｉ?２?ｂ?ｂ?ｂ?ｉ〇?ｈ?＾?ｈ??ｌ：Ｌ＿＾?＿Ｕ?：ＬＣＬｉｉ＿Ｄ－＿ｒＬ＿?：Ｌｉｉ?□?Ｕ?Ｕ??０３６?１２?０３６?１２?０３６?１２??處理時間?處理時間?處理時間??＾?Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ?ｔｉｍｅ／ｈ?Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ?ｔｉｍｅ?ｌｉ?ｒ?Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ?ｔｍｉｅ／ｈ??Ｄ?Ｅ?Ｆ??＊０?＾Ｓａｈ?＜?２００ｍｍｏｉＸ?Ｎａｄ）?３０?ＡＢＡ?（１０〇ｎｍｏＬＬ）?１５?ＧＡ?（４０〇ｎｍｏＬＬ）??．Ｓ?１－５?＊?？?？?２５?？?Ｉ?］??＊?１１０?ｒｒ?．?ｒｎ?ｎ?＾?「Ｔ?ｂ?１??１１?ｏ?ｓ?？?ｒｈ?１?，?ｎ?－?０?５?ｂ?土?ｔ??２。?。１?ｉ?Ｌｉ＿Ｕ?。丨?ＬＩ?由?Ｄ?ａ??０３６?１２?０３６?１２?０３６?１２??處理時間?處理時間?處理時間??Ｇ?Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ?ｔｉｍｅ?＂ｈ?Ｈ?Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ?ｔｉｍｅ?ｌｉ?Ｉ?Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ?ｔｕｎｅ?ｌｉ??ｉ〇?，??１６?ＭｅＪＡ?（ｌＯＯｎｍｏｉＬ）＊?４?

【參考文獻】：
期刊論文
[1]百合轉(zhuǎn)錄輔激活因子Ll MBF1c基因的克隆與表達分析[J]. 曹興,郭尚敬,高祥斌,呂福堂,隋娟娟,穆紅梅,吳澤,義鳴放,張秀省.  江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報. 2018(05)
[2]甜瓜自毒脅迫響應(yīng)基因CmFe-SOD的克隆及表達分析[J]. 張政達,王景榮,陳麗輝,樊佳茹,韓曉云,王革伏,張志忠.  果樹學(xué)報. 2018(11)
[3]祁連山東部青杄年內(nèi)徑向生長動態(tài)對氣候的響應(yīng)[J]. 牛豪閣,張芬,于愛靈,王放,張軍周,勾曉華.  生態(tài)學(xué)報. 2018(20)
[4]干旱對溝葉結(jié)縷草光合作用的影響[J]. 韓瑩瑩,馬一粼,呂歆,張珊,胡化廣,張振銘.  江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué). 2018(08)
[5]花鈴期土壤干旱對棉花葉片抗氧化及光合作用的影響[J]. 邵德意,羅海華,陳功,劉云濤,高欣,湯飛宇.  棉花學(xué)報. 2018(02)
[6]水稻Cu/Zn-SOD基因的克隆、表達及生物信息學(xué)分析[J]. 駱鷹,謝旻,張超,王偉平,朱建華,汪啟明,饒力群.  分子植物育種. 2018(10)
[7]山西關(guān)帝山區(qū)青杄育苗與移植技術(shù)[J]. 劉釗金.  山西林業(yè). 2017(03)
[8]白龍江珍稀瀕危植物大果青杄群落物種多樣性特征分析[J]. 齊瑞,郭星,趙陽,魏海龍,楊帆.  西北林學(xué)院學(xué)報. 2017(02)
[9]青杄PwUSP2基因的克隆和表達分析[J]. 周燕妮,李艷芳,張通,張凌云.  植物生理學(xué)報. 2015(08)
[10]MAPK級聯(lián)途徑參與ABA信號轉(zhuǎn)導(dǎo)調(diào)節(jié)的植物生長發(fā)育過程[J]. 李坤,王鮮萍,楊鳳博,許守明.  植物科學(xué)學(xué)報. 2014(05)

博士論文
[1]大豆FT/TFL1基因克隆、表達模式及功能分析[D]. 胡瑞波.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2009

碩士論文
[1]葡萄轉(zhuǎn)錄輔激活因子VvMBF1基因功能研究[D]. 閆琴.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2014
[2]陸地棉GhMBF1c基因及其啟動子的克隆與分析[D]. 楊召恩.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2013
[3]蠟梅Rhomboid蛋白基因CpRBL的克隆與功能的初步分析[D]. 楊洋.西南大學(xué) 2013



本文編號：3275638