目的觀察電針長(zhǎng)強(qiáng)穴對(duì)FMR1基因敲除小鼠海馬區(qū)CypA、ERK1/2及CREB蛋白表達(dá)的影響及對(duì)其阻斷效應(yīng)的研究。方法選取FMR1基因缺失且日齡為25日的KO小鼠,通過(guò)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)鑒定小鼠基因型,選取基因型為純合子型的小鼠入組,隨機(jī)分為空白組、長(zhǎng)強(qiáng)穴組、非經(jīng)非穴組和阻斷劑長(zhǎng)強(qiáng)穴組,共24只。所有組別的小鼠均于每日固定時(shí)間段進(jìn)行干預(yù),1天1次,連續(xù)干預(yù)14天。干預(yù)前、后連續(xù)兩天于固定時(shí)間內(nèi)對(duì)各組實(shí)驗(yàn)小鼠進(jìn)行自主活動(dòng)行為學(xué)測(cè)試。采取免疫組化法及免疫印跡法分析海馬區(qū)CypA、ERK1/2、CREB蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果①自主活動(dòng)行為學(xué)測(cè)試結(jié)果:干預(yù)后長(zhǎng)強(qiáng)穴組自主活動(dòng)及站立次數(shù)低于其他組別;干預(yù)后自主活動(dòng)及站立次數(shù)低于干預(yù)前。②免疫組化法檢測(cè)結(jié)果:長(zhǎng)強(qiáng)穴組CypA、CREB蛋白的陽(yáng)性平均光密度表達(dá)高于空白組、非經(jīng)非穴組和阻斷劑長(zhǎng)強(qiáng)穴組,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;長(zhǎng)強(qiáng)穴組ERK1/2蛋白的陽(yáng)性平均光密度表達(dá)高于空白組及阻斷劑長(zhǎng)強(qiáng)穴組,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。③免疫印跡法檢測(cè)結(jié)果:長(zhǎng)強(qiáng)穴組CypA、ERK1/2及CREB蛋白的表達(dá)高于空白組、非經(jīng)非穴組和阻斷劑長(zhǎng)強(qiáng)穴組,其... 

【文章來(lái)源】：時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥. 2019,30(01)北大核心CSCD

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基因鑒定結(jié)果q

VDF膜上，在凝膠成像系統(tǒng)中進(jìn)行化學(xué)發(fā)光顯影、采集及觀察。免疫印跡檢測(cè)過(guò)程中所有目的條帶以alphaTubulin為內(nèi)參，蛋白表達(dá)含量為各蛋白與alphaTubulin光密度積分值的比值。1．6統(tǒng)計(jì)學(xué)分析數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS21。采用單因素方差分析和最小顯著差法(LSD)進(jìn)行組間比較，P＜0．05提示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。采用配對(duì)t檢對(duì)干預(yù)前后實(shí)驗(yàn)小鼠自主活動(dòng)及站立行為進(jìn)行比較，P＜0．05提示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2結(jié)果2．1各組實(shí)驗(yàn)小鼠自主活動(dòng)站立行為學(xué)測(cè)試結(jié)果如圖2，干預(yù)后小鼠自主活動(dòng)行為長(zhǎng)強(qiáng)穴組與空白組、非經(jīng)非穴組相比顯著性降低，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．05);干預(yù)后小鼠自主站立行為長(zhǎng)強(qiáng)穴組及阻斷劑長(zhǎng)強(qiáng)穴組與非經(jīng)非穴組相比顯著性降低，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．05);干預(yù)后與干預(yù)前比較，長(zhǎng)強(qiáng)穴組實(shí)驗(yàn)小鼠自主活動(dòng)及站立行為顯著性降低。提示電針長(zhǎng)強(qiáng)穴對(duì)實(shí)驗(yàn)小鼠自主活動(dòng)站立行為有影響。*P＜0．05;＊＊P＜0．01;n=6圖2各組實(shí)驗(yàn)小鼠干預(yù)前后自主活動(dòng)站立行為學(xué)測(cè)試結(jié)果2．2免疫組化法檢測(cè)各組小鼠海馬區(qū)CypA、EＲK1/2、CＲEB表達(dá)的結(jié)果各組實(shí)驗(yàn)小鼠的免疫組化切片觀察中可看到:海馬區(qū)神經(jīng)元胞漿與突起內(nèi)有棕黃色免疫組化反應(yīng)顆粒狀沉積物。如圖3～5可見(jiàn)長(zhǎng)強(qiáng)穴組陽(yáng)性顆粒反應(yīng)物表達(dá)明顯且排列較密集，長(zhǎng)強(qiáng)穴組CypA、CＲEB蛋白的陽(yáng)性平均光密度表達(dá)高于空白組、非經(jīng)非穴組和阻斷劑長(zhǎng)強(qiáng)穴組，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．05);長(zhǎng)強(qiáng)穴組EＲK1/2蛋白的陽(yáng)性平均光密度表達(dá)高于空白組及阻斷劑長(zhǎng)強(qiáng)穴組，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．05)。提示電針長(zhǎng)強(qiáng)穴后可以激活CypA－EＲK1/2通路從而實(shí)現(xiàn)相關(guān)靶基因的轉(zhuǎn)錄，?

海馬區(qū)CypA、EＲK1/2、CＲEB蛋白的表達(dá)。*P＜0．05;＊＊P＜0．01;n=6圖3各組實(shí)驗(yàn)小鼠海馬區(qū)CypA蛋白陽(yáng)性目標(biāo)平均光密度比較*P＜0．05;＊＊P＜0．01;n=6圖4各組實(shí)驗(yàn)小鼠海馬區(qū)EＲK1/2蛋白陽(yáng)性目標(biāo)平均光密度比較*P＜0．05;＊＊P＜0．01;＊＊＊P＜0．001;n=6圖5各組實(shí)驗(yàn)小鼠海馬區(qū)CＲEB蛋白陽(yáng)性目標(biāo)平均光密度比較2．3免疫印跡法檢測(cè)各組小鼠海馬區(qū)CypA、EＲK1/2、CＲEB表達(dá)的結(jié)果如圖6～8長(zhǎng)強(qiáng)穴組CypA、EＲK1/2及CＲEB蛋白的表達(dá)高于空白組、非經(jīng)非穴組和阻斷劑長(zhǎng)強(qiáng)穴組，其中EＲK1/2及CＲEB蛋白具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．05)。電針長(zhǎng)強(qiáng)穴后海馬區(qū)長(zhǎng)強(qiáng)穴組CypA、EＲK1/2、CＲEB蛋白表達(dá)量增加，說(shuō)明電針長(zhǎng)強(qiáng)穴對(duì)海馬區(qū)該蛋白表達(dá)有促進(jìn)作用，阻斷劑長(zhǎng)強(qiáng)穴組表達(dá)量與空白組比較減少，提示PD98059對(duì)CypA－EＲK1/2通路有阻斷效應(yīng)。*P＜0．05;n=6圖6各組實(shí)驗(yàn)小鼠海馬區(qū)CypA蛋白相對(duì)表達(dá)量比較·932·LISHIZHENMEDICINEANDMATEＲIAMEDICAＲESEAＲCH2019VOL．30NO．1時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥2019年第30卷第1期

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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本文編號(hào)：3263816