ARHGEF3是鳥核苷酸交換因子（GEF）的一種,屬于DbI蛋白家族成員。眾所周知,GEF蛋白可通過調(diào)控Rho家族蛋白的激活來影響細胞骨架形成,基因的轉(zhuǎn)錄,細胞的生長和遷移等眾多生理功能。目前對ARHGEF3基因的研究相對較少。當前研究表明ARHGEF3蛋白發(fā)揮功能的分子機制主要包括兩種,第一種是作為GEF,特異性激活RhoA和RhoB蛋白;另外一種是作為MTORC2的內(nèi)源抑制分子。但ARHGEF3蛋白在腫瘤方面的研究甚少。另外ARHGEF3基因的反義鏈還可以轉(zhuǎn)錄一條新的長鏈非編碼RNA-ARHGEF3-AS1,對該lncRNA的功能目前尚未知曉。本課題旨在研究ARHGEF3蛋白在非小細胞肺癌細胞的功能與機制,另外還初步探討ARHGEF3-AS1在NSCLC細胞中的作用。我們研究發(fā)現(xiàn)ARHGEF3蛋白和ARHGEF3-AS1在非小細胞肺癌細胞中都呈高表達趨勢。敲低ARHGEF3蛋白表達抑制H1299和A549細胞的生長、遷移,并且將細胞周期抑制在G0/G1期。進一步研究發(fā)現(xiàn),ARHGEF3蛋白通過調(diào)控NF-kappaB信號通路影響Cyclin D1的轉(zhuǎn)錄從而影響細胞周期運轉(zhuǎn)。此外,我們... 

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【學位級別】：碩士

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ARHGEF3蛋白在非小細胞肺癌細胞中的表達

圖 2.2ARHGEF3 蛋白促進非小細胞肺癌細胞的生長。A.在 H1299 中敲低 ARHGEF3 蛋白的表達，進行細胞生長實驗，并用 Western Blot 檢測 ARHGEF3 基因的干擾效率。B. 在 A549細胞中敲低 ARHGEF3 蛋白的表達，進行細胞生長實驗，并用 Western Blot 檢測干擾效率。C.在 H1299 細胞中干擾 ARHGEF3 蛋白的表達，進行克隆集落形成實驗（上），克隆集落數(shù)量統(tǒng)計（右圖）在 A549 細胞中干擾 ARHGEF3 蛋白的表達，進行克隆集落形成實驗（下），克隆集落數(shù)量統(tǒng)計（右圖）。2.4.3 ARHGEF3 蛋白促進非小細胞肺癌細胞的遷移在 H1299 細胞中，利用 RNAi 技術(shù)特異性敲低 ARHGEF3 基因的表達后，做細胞劃痕、Transwell、鬼筆環(huán)肽染色實驗，觀察 ARHGEF3 蛋白對 NSCLC 細胞遷移的影響。實驗發(fā)現(xiàn)，敲低 ARHGEF3 蛋白的表達能明顯抑制細胞遷移能力（圖 2.3AB），并且抑制細胞偽足的形成（圖 2.3C）

圖 2.3 ARHGEF3 蛋白促進 NSCLC 細胞的遷移。在 H表達,48h 后進行實驗，A.劃痕處理，每隔 12h 拍照處細胞遷移的寬度，并計算遷移速率（右）。B.將細胞鋪穿過室的細胞進行拍照和計數(shù)統(tǒng)計（右）。C.進行鬼筆另外還檢測了 ARHGEF3 蛋白的敲低效果。2.5 討論ARHGEF3 蛋白在大腦、骨骼肌、腎臟、心異性的激活 Rho A 和 Rho B 兩種 Rho 家族蛋白現(xiàn)相對于正常的組織細胞 ARHGEF3 蛋白是高的異常高表達和腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。根據(jù)實驗，我們發(fā)現(xiàn) ARHGEF3 蛋白在非小水平，還是蛋白水平都是高表達的，而在正常支這和之前的研究是相吻合的。另外，敲低 ARH

【參考文獻】：
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本文編號：3262980