ARHGEF3是鳥核苷酸交換因子（GEF）的一種,屬于DbI蛋白家族成員。眾所周知,GEF蛋白可通過調(diào)控Rho家族蛋白的激活來影響細(xì)胞骨架形成,基因的轉(zhuǎn)錄,細(xì)胞的生長(zhǎng)和遷移等眾多生理功能。目前對(duì)ARHGEF3基因的研究相對(duì)較少。當(dāng)前研究表明ARHGEF3蛋白發(fā)揮功能的分子機(jī)制主要包括兩種,第一種是作為GEF,特異性激活RhoA和RhoB蛋白;另外一種是作為MTORC2的內(nèi)源抑制分子。但ARHGEF3蛋白在腫瘤方面的研究甚少。另外ARHGEF3基因的反義鏈還可以轉(zhuǎn)錄一條新的長(zhǎng)鏈非編碼RNA-ARHGEF3-AS1,對(duì)該lncRNA的功能目前尚未知曉。本課題旨在研究ARHGEF3蛋白在非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞的功能與機(jī)制,另外還初步探討ARHGEF3-AS1在NSCLC細(xì)胞中的作用。我們研究發(fā)現(xiàn)ARHGEF3蛋白和ARHGEF3-AS1在非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞中都呈高表達(dá)趨勢(shì)。敲低ARHGEF3蛋白表達(dá)抑制H1299和A549細(xì)胞的生長(zhǎng)、遷移,并且將細(xì)胞周期抑制在G0/G1期。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),ARHGEF3蛋白通過調(diào)控NF-kappaB信號(hào)通路影響Cyclin D1的轉(zhuǎn)錄從而影響細(xì)胞周期運(yùn)轉(zhuǎn)。此外,我們... 

【文章來源】：南昌大學(xué)江西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：54 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

ARHGEF3蛋白在非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞中的表達(dá)

圖 2.2ARHGEF3 蛋白促進(jìn)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)。A.在 H1299 中敲低 ARHGEF3 蛋白的表達(dá)，進(jìn)行細(xì)胞生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)，并用 Western Blot 檢測(cè) ARHGEF3 基因的干擾效率。B. 在 A549細(xì)胞中敲低 ARHGEF3 蛋白的表達(dá)，進(jìn)行細(xì)胞生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)，并用 Western Blot 檢測(cè)干擾效率。C.在 H1299 細(xì)胞中干擾 ARHGEF3 蛋白的表達(dá)，進(jìn)行克隆集落形成實(shí)驗(yàn)（上），克隆集落數(shù)量統(tǒng)計(jì)（右圖）在 A549 細(xì)胞中干擾 ARHGEF3 蛋白的表達(dá)，進(jìn)行克隆集落形成實(shí)驗(yàn)（下），克隆集落數(shù)量統(tǒng)計(jì)（右圖）。2.4.3 ARHGEF3 蛋白促進(jìn)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞的遷移在 H1299 細(xì)胞中，利用 RNAi 技術(shù)特異性敲低 ARHGEF3 基因的表達(dá)后，做細(xì)胞劃痕、Transwell、鬼筆環(huán)肽染色實(shí)驗(yàn)，觀察 ARHGEF3 蛋白對(duì) NSCLC 細(xì)胞遷移的影響。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，敲低 ARHGEF3 蛋白的表達(dá)能明顯抑制細(xì)胞遷移能力（圖 2.3AB），并且抑制細(xì)胞偽足的形成（圖 2.3C）

圖 2.3 ARHGEF3 蛋白促進(jìn) NSCLC 細(xì)胞的遷移。在 H表達(dá),48h 后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，A.劃痕處理，每隔 12h 拍照處細(xì)胞遷移的寬度，并計(jì)算遷移速率（右）。B.將細(xì)胞鋪穿過室的細(xì)胞進(jìn)行拍照和計(jì)數(shù)統(tǒng)計(jì)（右）。C.進(jìn)行鬼筆另外還檢測(cè)了 ARHGEF3 蛋白的敲低效果。2.5 討論ARHGEF3 蛋白在大腦、骨骼肌、腎臟、心異性的激活 Rho A 和 Rho B 兩種 Rho 家族蛋白現(xiàn)相對(duì)于正常的組織細(xì)胞 ARHGEF3 蛋白是高的異常高表達(dá)和腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。根據(jù)實(shí)驗(yàn)，我們發(fā)現(xiàn) ARHGEF3 蛋白在非小水平，還是蛋白水平都是高表達(dá)的，而在正常支這和之前的研究是相吻合的。另外，敲低 ARH

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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