昆蟲(chóng)病原真菌是昆蟲(chóng)病原微生物中最大的一個(gè)類(lèi)群,全世界已報(bào)道的昆蟲(chóng)病原真菌有近1000多種,是自然界控制昆蟲(chóng)種群數(shù)量的主要因素之一。綠僵菌（Metarhzium spp.）是一類(lèi)重要的昆蟲(chóng)病原真菌,目前已經(jīng)被廣泛地應(yīng)用于害蟲(chóng)的防治中[1]。但是由于傳統(tǒng)的綠僵菌農(nóng)藥致病過(guò)程較長(zhǎng)、殺蟲(chóng)較慢,不僅田間使用劑量大、成本高,而且防效易受環(huán)境影響,從而限制了綠僵菌殺蟲(chóng)劑的進(jìn)一步大規(guī)模的應(yīng)用。綠僵菌侵染昆蟲(chóng)是一個(gè)比較復(fù)雜的過(guò)程,其蛋白酶在綠僵菌入侵過(guò)程中起著重要的作用,是關(guān)鍵的毒力決定因子。目前在綠僵菌中研究較多的類(lèi)枯草桿菌蛋白酶（Prl）、類(lèi)胰凝乳蛋白酶（Pr2）。而金屬蛋白酶為綠僵菌侵染昆蟲(chóng)早期分泌出的一種胞外蛋白酶,也是一種重要的毒力因子。本實(shí)驗(yàn)的前期研究表明,野生型羅伯茨綠僵菌（Mr23）熱激后所形成的的基因表達(dá)譜,金屬蛋白酶1（Mamp1）的基因表達(dá)上調(diào)幅度明顯,因此我們推斷羅伯茨綠僵菌在熱脅迫條件下,Mamp1在孢子的耐熱過(guò)程中起重要的作用[2],且目前對(duì)Mamp1的毒力因子功能也未見(jiàn)進(jìn)行基因敲除驗(yàn)證。為了探討綠僵菌金屬蛋白酶的確切功能,本研究以野生型綠僵菌ARSEF 23（Metarhi... 

【文章來(lái)源】：安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)安徽省

【文章頁(yè)數(shù)】：68 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

目的基因的擴(kuò)增產(chǎn)物條帶進(jìn)行膠回收，然后連接到T載體上轉(zhuǎn)化大腸桿菌進(jìn)行克隆，得到的陽(yáng)性單克隆送Fig.3-1TheamplificationproductsoftargetgeneMamp1

然后連接到 T 載體上轉(zhuǎn)化大腸桿菌進(jìn)行克隆，得到的陽(yáng)性單克大基因進(jìn)行測(cè)序，測(cè)序結(jié)果用 Vctor 軟件進(jìn)行序列比對(duì)分析，結(jié)果與已知Mamp1 的 5′RACE 和 3′RACE 結(jié)果′RACE 反應(yīng)的結(jié)果如 4-2-5a 所示，條帶大小約為 300 bp ， 5′RACE 反應(yīng)Fig.3-1 The amplification products of target gene Mamp1

然后連接到 T 載體上轉(zhuǎn)化大腸桿菌進(jìn)行克隆，得到的陽(yáng)性單克大基因進(jìn)行測(cè)序，測(cè)序結(jié)果用 Vctor 軟件進(jìn)行序列比對(duì)分析，結(jié)果與已知Mamp1 的 5′RACE 和 3′RACE 結(jié)果′RACE 反應(yīng)的結(jié)果如 4-2-5a 所示，條帶大小約為 300 bp ， 5′RACE 反應(yīng)Fig.3-1 The amplification products of target gene Mamp1

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[2]蛇毒金屬蛋白酶[J]. 張雷,劉明華.  中國(guó)急救醫(yī)學(xué). 2013 (11)
[3]真菌殺蟲(chóng)劑的研究現(xiàn)狀與展望[J]. 解嬌,劉霞,張正坤,徐文靜,李啟云.  吉林農(nóng)業(yè)科學(xué). 2012(01)
[4]營(yíng)養(yǎng)條件對(duì)綠僵菌生長(zhǎng)特性和抑菌活性的影響[J]. 齊永霞,陳方新,李增智.  食品與發(fā)酵工業(yè). 2011(07)
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[7]我國(guó)微生物殺蟲(chóng)劑的研究應(yīng)用及展望[J]. 譚云峰,田志來(lái).  吉林農(nóng)業(yè)科學(xué). 2005(03)
[8]蟲(chóng)生真菌對(duì)害蟲(chóng)防治的研究與應(yīng)用[J]. 何恒果,李正躍,陳斌,文良柱.  云南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 2004(02)
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[10]生物殺蟲(chóng)劑的研究進(jìn)展與展望[J]. 張善明,姚倫廣,彭建新,洪華珠.  荊州師范學(xué)院學(xué)報(bào). 2000(02)

博士論文
[1]杉木轉(zhuǎn)基因受體系統(tǒng)的建立及遺傳轉(zhuǎn)化研究[D]. 席夢(mèng)利.南京林業(yè)大學(xué) 2004



本文編號(hào)：3259035