昆蟲病原真菌是昆蟲病原微生物中最大的一個類群,全世界已報道的昆蟲病原真菌有近1000多種,是自然界控制昆蟲種群數(shù)量的主要因素之一。綠僵菌（Metarhzium spp.）是一類重要的昆蟲病原真菌,目前已經被廣泛地應用于害蟲的防治中[1]。但是由于傳統(tǒng)的綠僵菌農藥致病過程較長、殺蟲較慢,不僅田間使用劑量大、成本高,而且防效易受環(huán)境影響,從而限制了綠僵菌殺蟲劑的進一步大規(guī)模的應用。綠僵菌侵染昆蟲是一個比較復雜的過程,其蛋白酶在綠僵菌入侵過程中起著重要的作用,是關鍵的毒力決定因子。目前在綠僵菌中研究較多的類枯草桿菌蛋白酶（Prl）、類胰凝乳蛋白酶（Pr2）。而金屬蛋白酶為綠僵菌侵染昆蟲早期分泌出的一種胞外蛋白酶,也是一種重要的毒力因子。本實驗的前期研究表明,野生型羅伯茨綠僵菌（Mr23）熱激后所形成的的基因表達譜,金屬蛋白酶1（Mamp1）的基因表達上調幅度明顯,因此我們推斷羅伯茨綠僵菌在熱脅迫條件下,Mamp1在孢子的耐熱過程中起重要的作用[2],且目前對Mamp1的毒力因子功能也未見進行基因敲除驗證。為了探討綠僵菌金屬蛋白酶的確切功能,本研究以野生型綠僵菌ARSEF 23（Metarhi... 

【文章來源】：安徽農業(yè)大學安徽省

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

目的基因的擴增產物條帶進行膠回收，然后連接到T載體上轉化大腸桿菌進行克隆，得到的陽性單克隆送Fig.3-1TheamplificationproductsoftargetgeneMamp1

然后連接到 T 載體上轉化大腸桿菌進行克隆，得到的陽性單克大基因進行測序，測序結果用 Vctor 軟件進行序列比對分析，結果與已知Mamp1 的 5′RACE 和 3′RACE 結果′RACE 反應的結果如 4-2-5a 所示，條帶大小約為 300 bp ， 5′RACE 反應Fig.3-1 The amplification products of target gene Mamp1

然后連接到 T 載體上轉化大腸桿菌進行克隆，得到的陽性單克大基因進行測序，測序結果用 Vctor 軟件進行序列比對分析，結果與已知Mamp1 的 5′RACE 和 3′RACE 結果′RACE 反應的結果如 4-2-5a 所示，條帶大小約為 300 bp ， 5′RACE 反應Fig.3-1 The amplification products of target gene Mamp1

【參考文獻】：
期刊論文
[1]我國利用真菌防治害蟲的歷史、進展及現(xiàn)狀[J]. 李增智.  中國生物防治學報. 2015(05)
[2]蛇毒金屬蛋白酶[J]. 張雷,劉明華.  中國急救醫(yī)學. 2013 (11)
[3]真菌殺蟲劑的研究現(xiàn)狀與展望[J]. 解嬌,劉霞,張正坤,徐文靜,李啟云.  吉林農業(yè)科學. 2012(01)
[4]營養(yǎng)條件對綠僵菌生長特性和抑菌活性的影響[J]. 齊永霞,陳方新,李增智.  食品與發(fā)酵工業(yè). 2011(07)
[5]基因工程改良在昆蟲病原真菌中的應用[J]. 邊強,王廣君,張澤華,高松,農向群.  中國生物工程雜志. 2009(03)
[6]蟲生真菌分子致病機理及基因工程改造研究進展[J]. 呂丁丁,李增智,王成樹.  微生物學通報. 2008(03)
[7]我國微生物殺蟲劑的研究應用及展望[J]. 譚云峰,田志來.  吉林農業(yè)科學. 2005(03)
[8]蟲生真菌對害蟲防治的研究與應用[J]. 何恒果,李正躍,陳斌,文良柱.  云南農業(yè)大學學報. 2004(02)
[9]柱孢綠僵菌和綠色野村菌分類地位的研究[J]. 黃勃,李世貴,李春如,樊美珍,李增智.  菌物學報. 2004(01)
[10]生物殺蟲劑的研究進展與展望[J]. 張善明,姚倫廣,彭建新,洪華珠.  荊州師范學院學報. 2000(02)

博士論文
[1]杉木轉基因受體系統(tǒng)的建立及遺傳轉化研究[D]. 席夢利.南京林業(yè)大學 2004



本文編號：3259035