目的:乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤,死亡率繼肺癌之后,位列女性惡性腫瘤死亡率第二。根據(jù)美國癌癥協(xié)會最新統(tǒng)計數(shù)據(jù),1989年至2015年間,死亡率下降了39%,322600美國乳腺癌女性的命運被扭轉(zhuǎn),這得益于診療方法的提高（例如輔助化療、內(nèi)分泌治療、靶向治療等）和乳腺疾病的早期篩查。過去的20多年間,在遺傳性疾病、惡性腫瘤、慢性感染性疾病等多領(lǐng)域展開了基因治療的相關(guān)實驗,一些基于基因治療的I期、II期臨床試驗報道了嚴重的血液、免疫、神經(jīng)系統(tǒng)遺傳性疾病中基因治療的顯著療效。自殺基因Dm-dNK編碼的果蠅多底物脫氧核苷酸激酶具有廣泛的底物特異性,能有效催化自然界所有的脫氧核糖核酸的磷酸化反應(yīng),催化效率比一般的核苷酸激酶高10-100倍,已有研究證實其作為自殺基因聯(lián)合癌前藥物在多種惡性腫瘤細胞的有效作用,不僅能直接殺傷腫瘤細胞,還能通過旁觀者效應(yīng)間接殺傷,同時有效提高對化療藥物的敏感性。乳腺癌、腸癌、肝癌等多種癌細胞表面均表達CD40,已有研究證明CD40-CD40配體（CD40 ligand,CD40L）交互作用能增強免疫應(yīng)答,誘導(dǎo)抗原呈遞細胞的活化,還可通過誘導(dǎo)癌細胞凋亡直接抑制腫瘤生長。... 

【文章來源】：中國醫(yī)科大學遼寧省

【文章頁數(shù)】：84 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

溶瘤腺病毒P74,P74-dNK，P74-CD40L,P74-dNK-CD40L的構(gòu)建結(jié)構(gòu)圖

圖 2 用攜帶綠色熒光蛋白的選擇復(fù)制型腺病毒 Ad-GFP 感染三種細胞系，感染率相近。3.2 目的基因的表達及酶活性的檢測3.2.1RNA 水平檢測重組腺病毒中目的基因表達。兩種乳腺癌細胞系 MDA-MB-231, MCF-7,人胚肺成纖維細胞 MRC5 感染P74-dNK,P74-CD40L,P74-dNK-CD40L 和 Ad-WT（MOI=1），24h 后收取 RNA 逆轉(zhuǎn)錄，擴增 dNK，CD40L, GAPDH, 結(jié)果見下圖。重組病毒在 RNA 水平穩(wěn)定表達目的基因。

中國醫(yī)科大學博士學位論文21圖3 不同細胞感染P74-dNK, P74-CD40L, P74-dNK-CD40L, Ad-WT后, 提取RNA，RT-PCR 驗證，其中：Dm-dNK-6his（799 bp），CD40L（764 bp），GAPDH(452 bp)。3.2.2 蛋白水平驗證目的基因的表達乳腺癌細胞系 MDA-MB-231 和正常細胞系 MRC5 感染 Ad-WT, P74-dNK,P74-CD40L, P74-dNK-CD40L,檢測 E1A 表達情況，可見兩種細胞系中均有 E1A 表達，驗證重組腺病毒中 E1A 并未缺失，然 MRC5 中 Ad-WT 表達較其他重組病毒E1A 表達明顯增強

【參考文獻】：
期刊論文
[1]慢病毒載體及其研究進展[J]. 孟凡榮,陳琛,萬海粟,周清華.  中國肺癌雜志. 2014(12)
[2]Activation of CD40 by Soluble Recombinant Human CD40 Ligand Inhibits Human Glioma Cells Proliferation via Nuclear Factor-κB Signaling Pathway[J]. 張勇,黃濤,胡誼,王煜.  Journal of Huazhong University of Science and Technology（Medical Sciences）. 2012(05)



本文編號：3252670