沙生植物檸條錦雞兒生長(zhǎng)在半干旱、干旱地區(qū),抗逆性極強(qiáng)。本研究以前期構(gòu)建的檸條錦雞兒干旱處理前后的基因差異表達(dá)數(shù)據(jù)庫(kù)為基礎(chǔ),通過(guò)生物信息學(xué)分析,獲得抗旱候選基因,對(duì)部分候選基因進(jìn)行了初步功能驗(yàn)證分析。主要結(jié)果如下:（1）從生物信息學(xué)分析得到的49個(gè)差異上調(diào)表達(dá)基因中,隨機(jī)挑選14個(gè)基因進(jìn)行qRT-PCR檢測(cè),結(jié)果發(fā)現(xiàn)它們的表達(dá)趨勢(shì)均與測(cè)序數(shù)據(jù)結(jié)果一致。這表明前期所獲得的干旱脅迫差異上調(diào)表達(dá)基因是正確的。（2）經(jīng)過(guò)進(jìn)一步的生物信息學(xué)分析,在49個(gè)差異上調(diào)表達(dá)基因中,只有22個(gè)基因具有完整ORF結(jié)構(gòu);利用所設(shè)計(jì)的特異引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增,發(fā)現(xiàn)其中16個(gè)基因片段大小正確。（3）對(duì)這16個(gè)候選目的基因進(jìn)行克隆,構(gòu)建表達(dá)載體,采用In-Fusion方法連接目的基因與載體,構(gòu)建重組質(zhì)粒并轉(zhuǎn)入大腸桿菌。并通過(guò)凍融法將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入到農(nóng)桿菌感受態(tài)中,驗(yàn)證陽(yáng)性克隆后通過(guò)蘸花法轉(zhuǎn)化擬南芥。獲得轉(zhuǎn)基因擬南芥種子后,將16個(gè)候選基因的轉(zhuǎn)基因株系通過(guò)正常條件下培養(yǎng)觀察根長(zhǎng)變化,結(jié)果發(fā)現(xiàn)第9號(hào)、13號(hào)、18號(hào)基因的轉(zhuǎn)基因株系的根長(zhǎng)同野生型相比較長(zhǎng)。其中,9號(hào)基因的轉(zhuǎn)基因株系的根長(zhǎng)顯著高于野生型。（4）選擇第9號(hào)基因的轉(zhuǎn)... 

【文章來(lái)源】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)四川省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：67 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

一個(gè)月大苗齡檸條錦雞兒干旱處理后后表型及高通量測(cè)序后差異基因顯示圖

本實(shí)驗(yàn)所用表達(dá)載體圖譜

圖 4 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的擬南芥轉(zhuǎn)化圖A：三周大擬南芥；B：擬南芥花序侵染Figure 4 Agrobacterium-mediated Arabidopsis transformationA:Three weeks old Arabidopsis thaliana ;B: Inflorescence in Arabidopsis thaliana

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]植物氣孔發(fā)育機(jī)制研究進(jìn)展[J]. 王宏亮,郭思義,王棚濤,宋純鵬.  植物學(xué)報(bào). 2018(02)
[2]葉面噴施ABA對(duì)積雪草相連分株抗旱性的影響[J]. 謝欣然,陳彥弛,胡宇軒,劉洪宇.  草學(xué). 2018(01)
[3]紫花苜蓿MsLEA4-4基因的克隆、表達(dá)分析及遺傳轉(zhuǎn)化[J]. 賈會(huì)麗,王學(xué)敏,郭繼承,高洪文,吳欣明,劉建寧,石永紅,董寬虎,王運(yùn)琦.  草業(yè)學(xué)報(bào). 2017(12)
[4]干旱脅迫下外源ABA對(duì)鼓粒期大豆產(chǎn)量及氮代謝關(guān)鍵酶活性的影響[J]. 屈春媛,張玉先,金喜軍,任春元,張明聰,王孟雪,王彥宏,李菁華,鄭浩宇,鄒京南.  中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào). 2017(34)
[5]不同生育期干旱對(duì)紫花苜蓿生長(zhǎng)和根系A(chǔ)BA含量的影響[J]. 李躍,李振松,苗麗宏,王宇菲,仝宗永,何峰,萬(wàn)里強(qiáng),李向林.  草地學(xué)報(bào). 2017(06)
[6]胚胎發(fā)育晚期豐富蛋白（LEA蛋白）與植物抗逆性研究進(jìn)展[J]. 張美,張會(huì).  生物資源. 2017(03)
[7]檸條錦雞兒CkLEA4-1基因的克隆及表達(dá)分析[J]. 滑璐玢,于秀敏,楊杞,王瑞剛,寶力德.  華北農(nóng)學(xué)報(bào). 2017(02)
[8]不同林齡檸條錦雞兒土壤有效磷的變化[J]. 郭月峰,祁偉,姚云峰,王娟,王劍然.  中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào). 2017(12)
[9]bZIP轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控植物次生代謝產(chǎn)物生物合成的研究進(jìn)展[J]. 張瑜,徐志超,季愛(ài)加,宋經(jīng)元.  植物科學(xué)學(xué)報(bào). 2017(01)
[10]植物氣孔發(fā)育的分子調(diào)控機(jī)制[J]. 陳青云,李有志,樊憲偉.  遺傳. 2017(04)

碩士論文
[1]錦雞兒屬（Caragana Fabr.）三種植物實(shí)生苗干旱脅迫響應(yīng)機(jī)制的比較研究[D]. 郝婧.內(nèi)蒙古大學(xué) 2010
[2]三種錦雞兒屬植物幼苗對(duì)水分脅迫的響應(yīng)[D]. 姚華.新疆師范大學(xué) 2009
[3]寧夏鹽池沙地沙柳檸條抗旱生理及其土壤水分特征研究[D]. 張進(jìn)虎.北京林業(yè)大學(xué) 2008
[4]檸條葉粉對(duì)羊的飼用價(jià)值的研究[D]. 弓劍.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2004



本文編號(hào)：3251529