DREB類轉(zhuǎn)錄因子在非生物脅迫過程中起重要作用,目前,對DREB類轉(zhuǎn)錄因子研究多集中在功能驗證上,對其分子調(diào)控機制研究較少。本實驗室前期研究表明超表達MrDREB1基因在扁蓿豆中可以提高扁蓿豆對低溫、干旱、高鹽的抗性。說明MrDREB1基因可以增強植物對非生物脅迫的抗逆性。本研究以扁蓿豆的MrDREB1基因為研究對象,通過毛根轉(zhuǎn)化法將超表達MrDREB1基因載體、tasiRNA介導的MrDREB1基因沉默載體和對照載體轉(zhuǎn)入扁蓿豆根組織中,熒光體式顯微鏡檢測出有外源基因表達的扁蓿豆根組織。提取單株扁蓿豆根組織RNA,每個樣品3個生物學重復,共9個樣品。通過Q-PCR方法檢測抗逆相關(guān)基因MrERD10和MrCAS15A的相對表達量,MrERD10和MrCAS15A基因在超表達MrDREB1基因扁蓿豆中表達量高于對照組,在基因沉默MrDREB1基因扁蓿豆表達量低于對照組,證明瞬時表達構(gòu)建可靠,可以進行轉(zhuǎn)錄組測序。通過對轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)分析得到受MrDREB1基因調(diào)控的抗非生物脅迫相關(guān)的基因。扁蓿豆轉(zhuǎn)錄組測序得到67.35Gb clean bases,對原始序列進行過濾后經(jīng)de nove組裝得到28... 

【文章來源】：內(nèi)蒙古大學內(nèi)蒙古自治區(qū) 211工程院校

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

DREB/CBF轉(zhuǎn)錄因子結(jié)構(gòu)示意圖

內(nèi)蒙古大學碩士論文3 結(jié)果與分析3.1 毛根轉(zhuǎn)化扁蓿豆幼苗篩選利用毛根轉(zhuǎn)化可以將外源基因?qū)胧荏w植物中進行瞬時表達，可以快速、安全高效植物體內(nèi)的基因表達模式。本次實驗使用毛根轉(zhuǎn)化方法得到轉(zhuǎn)超表達 MrDREB1 扁、轉(zhuǎn)空載體扁蓿豆幼苗、轉(zhuǎn)由 tasi-RNA 介導的基因沉默 MrDREB1 基因幼苗。在毛幼苗生長 15 天進行熒光顯微鏡篩選，轉(zhuǎn)入成功的幼苗根部在綠色激發(fā)光的熒光顯檢測紅色熒光，結(jié)果如圖 3.1 所示。

MrDREB1 基因在扁蓿豆逆境脅迫調(diào)控應答中分子機理的初步研究3.2 扁蓿豆總 RNA 的驗證程（大連）有限公司購得的 TaKaRa MiniBEST PlanA 的操作結(jié)果，在 1.0%的瓊脂凝膠中電泳檢測，結(jié)條帶清晰且明亮，能清楚觀察到 28S rRNA 和 18S 提取的 RNA 濃度，RNA 濃度在 46ng/μl 到 256ng/μl間，說明 RNA 質(zhì)量較好。

【參考文獻】：
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本文編號：3248729