黃花苜蓿具有抗旱、耐寒、耐鹽堿等優(yōu)良特性,是苜�？剐杂N的重要種質(zhì)資源,也是十分重要的基因庫。NAC轉(zhuǎn)錄因子是植物中特有的轉(zhuǎn)錄因子家族之一,在植物生長發(fā)育、成熟以及適應(yīng)逆境脅迫中發(fā)揮重要作用。本研究克隆獲得了黃花苜蓿MfNAC35基因啟動子區(qū)序列,分析發(fā)現(xiàn)其含有抗逆調(diào)節(jié)相關(guān)作用元件。Real-time PCR分析顯示MfNAC35在黃花苜蓿根部的表達(dá)量較大,在莖中的表達(dá)量較少,且在根、莖、葉中的表達(dá)均被鹽和干旱脅迫上調(diào)。酵母實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示MfNAC35具有轉(zhuǎn)錄激活功能,且功能域位于蛋白的C端。以植物雙元表達(dá)載體pBI121（35S-NOS）為骨架,構(gòu)建超表達(dá)載體pBI121（35S-MfNAC35-NOS）,利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)葉盤轉(zhuǎn)化法轉(zhuǎn)化本氏煙草,PCR鑒定篩選獲得15株T0代轉(zhuǎn)基因植株,RT-PCR分析顯示MfNAC35已在T0代轉(zhuǎn)基因植株中獲得表達(dá),且鹽或干旱脅迫可調(diào)節(jié)煙草抗逆相關(guān)基因CAT、SOD、P5CS表達(dá)的上調(diào),初步表明MfNAC35可能是通過調(diào)節(jié)抗逆相關(guān)基因的表達(dá),進(jìn)而參與調(diào)節(jié)抗逆性的分子機(jī)理。 

【文章來源】：內(nèi)蒙古大學(xué)內(nèi)蒙古自治區(qū) 211工程院校

【文章頁數(shù)】：53 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

載體pGBKT7-DBD-MfNAC35（c）示意圖

圖 2.2 pBI121（35S-MfNAC35-NOS）載體與檢測引物位點(diǎn)示意圖引物 pBI121-（35S-MfNAC35）F 位點(diǎn)；P2：引物 pBI121-（35S-MfNAC35）R 位點(diǎn)；引物 pBI121-（MfNAC35-NOS）F 位點(diǎn)；P4：引物 pBI121-（MfNAC35-NOS）R 位點(diǎn)Fig.2.2 The sketch map of pBI121 (35S-MfNAC35-NOS) vector and primer landing sitehe site of prime pBI121-（35S-MfNAC35）F; P2: The site of prime pBI121-（35S-MfNAhe site of prime pBI121-（MfNAC35-NOS）F; P4: The site of prime pBI121-（MfNAC3化植株的 PCR 檢測 法[71]提取轉(zhuǎn)化植株葉片 DNA 作為模板，以圖 2.2 所示設(shè)計引物 pBI121-AC35）F 和 pBI121（-35S-MfNAC35）R 以及 pBI121（-MfNAC35-NOS）F 和 5-NOS）R，進(jìn)行 PCR 鑒定轉(zhuǎn)化 pBI121-（35S-MfNAC35-NOS）的再生植0×PCR Buffer 2.5 μL物 1 2.5 μL物 2 2.5 μLNTPS(2.5 mmol/Leach) 2 μL

圖 3.1 MfNAC35 保守結(jié)構(gòu)域分析Fig.3.1Analysis of conserved domains of MfNAC35表 3.1 MfNAC35 基因的氨基酸組成Table3.1Amino acid content of MfNAC35一級結(jié)構(gòu)預(yù)測 ProtParam 軟件包分析該蛋白的一級結(jié)構(gòu)及其理化性質(zhì)，結(jié)果如表 3.1 和AC35 蛋白分子量約為 33.79kDa，等電點(diǎn)為 6.46，為酸性蛋白，含有 292 、Pro 和 Asp 含量相對較高，分別為 9.2%和 7.2%；帶負(fù)電荷的殘基 (As正電荷的殘基(Arg + Lys)為 38 個，推測該蛋白帶負(fù)電荷；蛋白質(zhì)的穩(wěn)定系數(shù)定蛋白[76]。氨基酸 數(shù)量 百分比 氨基酸 數(shù)量 百分比

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]不同處理對打破野生黃花苜蓿種子硬實(shí)的效果研究[J]. 伊風(fēng)艷,王曉娟,楊鼎,邱曉,孫海蓮,賈明,劉思博.  種子. 2018(01)
[2]甘藍(lán)OguCMS育性相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子BoMYB1的轉(zhuǎn)錄激活功能分析[J]. 陳玉娟,頡建明,郭盈盈,康俊根.  西北農(nóng)業(yè)學(xué)報. 2014(10)
[3]水分脅迫下16個玉米NAC轉(zhuǎn)錄因子的序列特征和表達(dá)分析[J]. 張進(jìn)艷,陳芳,李亮,馬藝文,王振萍,姜立雁,王化俊,郝轉(zhuǎn)芳.  山西農(nóng)業(yè)科學(xué). 2014(04)
[4]NAC轉(zhuǎn)錄因子在植物抗病和抗非生物脅迫反應(yīng)中的作用[J]. 孫利軍,李大勇,張慧娟,宋鳳鳴.  遺傳. 2012(08)

博士論文
[1]水稻ONAC家族基因重疊表達(dá)特性及其在抗病抗逆中的功能研究[D]. 孫利軍.浙江大學(xué) 2012
[2]中國黃花苜蓿野生種質(zhì)資源研究[D]. 王俊杰.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué) 2008

碩士論文
[1]野生黃花苜蓿MfNAC3的克隆分析及表達(dá)載體的構(gòu)建[D]. 張芳蜞.內(nèi)蒙古大學(xué) 2017
[2]黃花苜蓿NAC轉(zhuǎn)錄因子的初步研究[D]. 邵琪.內(nèi)蒙古大學(xué) 2016
[3]白沙蒿鐵蛋白基因?qū)煵莸倪z傳轉(zhuǎn)化及其抗旱性檢測[D]. 張芳.蘭州大學(xué) 2013



本文編號：3244961