黃花苜蓿具有抗旱、耐寒、耐鹽堿等優(yōu)良特性,是苜�？剐杂N的重要種質資源,也是十分重要的基因庫。NAC轉錄因子是植物中特有的轉錄因子家族之一,在植物生長發(fā)育、成熟以及適應逆境脅迫中發(fā)揮重要作用。本研究克隆獲得了黃花苜蓿MfNAC35基因啟動子區(qū)序列,分析發(fā)現其含有抗逆調節(jié)相關作用元件。Real-time PCR分析顯示MfNAC35在黃花苜蓿根部的表達量較大,在莖中的表達量較少,且在根、莖、葉中的表達均被鹽和干旱脅迫上調。酵母實驗結果顯示MfNAC35具有轉錄激活功能,且功能域位于蛋白的C端。以植物雙元表達載體pBI121（35S-NOS）為骨架,構建超表達載體pBI121（35S-MfNAC35-NOS）,利用農桿菌介導葉盤轉化法轉化本氏煙草,PCR鑒定篩選獲得15株T0代轉基因植株,RT-PCR分析顯示MfNAC35已在T0代轉基因植株中獲得表達,且鹽或干旱脅迫可調節(jié)煙草抗逆相關基因CAT、SOD、P5CS表達的上調,初步表明MfNAC35可能是通過調節(jié)抗逆相關基因的表達,進而參與調節(jié)抗逆性的分子機理。 

【文章來源】：內蒙古大學內蒙古自治區(qū) 211工程院校

【文章頁數】：53 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

載體pGBKT7-DBD-MfNAC35（c）示意圖

圖 2.2 pBI121（35S-MfNAC35-NOS）載體與檢測引物位點示意圖引物 pBI121-（35S-MfNAC35）F 位點；P2：引物 pBI121-（35S-MfNAC35）R 位點；引物 pBI121-（MfNAC35-NOS）F 位點；P4：引物 pBI121-（MfNAC35-NOS）R 位點Fig.2.2 The sketch map of pBI121 (35S-MfNAC35-NOS) vector and primer landing sitehe site of prime pBI121-（35S-MfNAC35）F; P2: The site of prime pBI121-（35S-MfNAhe site of prime pBI121-（MfNAC35-NOS）F; P4: The site of prime pBI121-（MfNAC3化植株的 PCR 檢測 法[71]提取轉化植株葉片 DNA 作為模板，以圖 2.2 所示設計引物 pBI121-AC35）F 和 pBI121（-35S-MfNAC35）R 以及 pBI121（-MfNAC35-NOS）F 和 5-NOS）R，進行 PCR 鑒定轉化 pBI121-（35S-MfNAC35-NOS）的再生植0×PCR Buffer 2.5 μL物 1 2.5 μL物 2 2.5 μLNTPS(2.5 mmol/Leach) 2 μL

圖 3.1 MfNAC35 保守結構域分析Fig.3.1Analysis of conserved domains of MfNAC35表 3.1 MfNAC35 基因的氨基酸組成Table3.1Amino acid content of MfNAC35一級結構預測 ProtParam 軟件包分析該蛋白的一級結構及其理化性質，結果如表 3.1 和AC35 蛋白分子量約為 33.79kDa，等電點為 6.46，為酸性蛋白，含有 292 、Pro 和 Asp 含量相對較高，分別為 9.2%和 7.2%；帶負電荷的殘基 (As正電荷的殘基(Arg + Lys)為 38 個，推測該蛋白帶負電荷；蛋白質的穩(wěn)定系數定蛋白[76]。氨基酸 數量 百分比 氨基酸 數量 百分比

【參考文獻】：
期刊論文
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[3]水分脅迫下16個玉米NAC轉錄因子的序列特征和表達分析[J]. 張進艷,陳芳,李亮,馬藝文,王振萍,姜立雁,王化俊,郝轉芳.  山西農業(yè)科學. 2014(04)
[4]NAC轉錄因子在植物抗病和抗非生物脅迫反應中的作用[J]. 孫利軍,李大勇,張慧娟,宋鳳鳴.  遺傳. 2012(08)

博士論文
[1]水稻ONAC家族基因重疊表達特性及其在抗病抗逆中的功能研究[D]. 孫利軍.浙江大學 2012
[2]中國黃花苜蓿野生種質資源研究[D]. 王俊杰.內蒙古農業(yè)大學 2008

碩士論文
[1]野生黃花苜蓿MfNAC3的克隆分析及表達載體的構建[D]. 張芳蜞.內蒙古大學 2017
[2]黃花苜蓿NAC轉錄因子的初步研究[D]. 邵琪.內蒙古大學 2016
[3]白沙蒿鐵蛋白基因對煙草的遺傳轉化及其抗旱性檢測[D]. 張芳.蘭州大學 2013



本文編號：3244961