翻譯后修飾指的是修飾基團添加到翻譯后蛋白質的一個或者多個氨基酸殘基上,可改變該蛋白的空間構象和生物學活性。翻譯后修飾廣泛參與調控細胞周期、增殖、凋亡、分化基因表達、信號傳遞等一系列生命活動,異常的翻譯后修飾與疾病和腫瘤的發(fā)生密切相關。組蛋白泛素化是共價翻譯后修飾之一,泛素化修飾過程通常由泛素激活酶E1、泛素結合酶E2和泛素連接酶E3共同調節(jié)完成整個泛素級聯(lián)反應。真核細胞中,染色質是由基因組DNA纏繞核小體構成的,核小體的核心部分是由組蛋白H2A,H2B,H3和H4各2個分子構成的蛋白8聚體。RNF20/RNF40二聚體（RING finger protein RNF20/RNF40 dimer）是催化人H2B組蛋白120位賴氨酸（lysine）單泛素化（H2Bub1）反應的E3泛素連接酶。H2Bub1介導基因轉錄調控,染色質重塑,并在DNA雙鏈斷裂損傷修復途徑之一的同源重組修復（Homologous Recombination,HR）中發(fā)揮重要的作用。RNF20/RNF40二聚體的缺失會導致同源重組修復中修復因子不能募集到DNA損傷位點上,導致DNA雙鏈斷裂損傷的累積并影響基因組的穩(wěn)定... 

【文章來源】：上海師范大學上海市

【文章頁數(shù)】：53 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

RNF20/RNF40/WAC復合物在基因轉錄調控中的作用

R-loop的結構

第二章WAC與sc35有內源性的相互作用上海師范大學碩士學位論文10放入稀釋好的二抗中，放在搖床上室溫孵育1.5h，孵育結束后用1×TBST緩沖液洗膜3次，每次8-10min。6.曝光：將ECL發(fā)光底物A和B兩種試劑等體積混合，取出完成抗體孵育的PVDF膜，放在保鮮膜上，正面朝上，將ECL混合液滴到PVDF膜上，放入化學發(fā)光成像儀中，調節(jié)適當?shù)钠毓鈺r間，得到最優(yōu)結果，最后對蛋白條帶進行分析。2.4實驗結果2.4.1WAC與sc35兩種蛋白有相互作用圖2-1WAC與sc35內源相互作用為了探究WAC與sc35兩種蛋白的相互作用情況，我們進行了內源性Co-IP實驗，裂解HCT116細胞獲得全細胞提取物，加入ProteinAAgrose，WAC抗體或sc35抗體孵育過夜，通過ProteinAAgrose結合兔源抗體將目的蛋白沉淀下來，然后再進行Western-blot實驗，用WAC,sc35以及β-actin抗體進行免疫印跡分析，來研究內源性的蛋白相互作用的情況。實驗結果如圖2-1所示，WAC抗體能將sc35蛋白沉淀下來，同時sc35抗體也能將WAC蛋白沉淀下來，而對作為照的IgG抗體則不能將sc35或WAC蛋白沉淀下來。β-actin抗體孵育組是本實驗的對照組。這些結果表明兩種蛋白質WAC與sc35有相互作用。2.5本章小結降解R-loop的方法有多種，可以防止由于R-loop的累積與轉錄復制碰撞形成的轉錄副產物威脅基因組的穩(wěn)定性。sc35，RNF20/RNF40二聚體在維持基因組穩(wěn)定性中都起到了重要的作用。與RNF20/RNF40復合物的功能一致，sc35的缺失也會導致R-loop的積累。WAC作為RNF20/RNF40二聚體的重要功能伙伴，與RNF20/RNF40二聚體形RNF20/RNF40/WAC復合物，共同發(fā)揮生物學功能。本章我們通過內源性的Co-IP實驗證明WAC與sc35有相互作用，為接下來WAC與sc35是否在基因轉錄與DNA損傷修復中發(fā)揮作用的研究奠定了基矗


本文編號：3227606