翻譯后修飾指的是修飾基團(tuán)添加到翻譯后蛋白質(zhì)的一個(gè)或者多個(gè)氨基酸殘基上,可改變?cè)摰鞍椎目臻g構(gòu)象和生物學(xué)活性。翻譯后修飾廣泛參與調(diào)控細(xì)胞周期、增殖、凋亡、分化基因表達(dá)、信號(hào)傳遞等一系列生命活動(dòng),異常的翻譯后修飾與疾病和腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)。組蛋白泛素化是共價(jià)翻譯后修飾之一,泛素化修飾過(guò)程通常由泛素激活酶E1、泛素結(jié)合酶E2和泛素連接酶E3共同調(diào)節(jié)完成整個(gè)泛素級(jí)聯(lián)反應(yīng)。真核細(xì)胞中,染色質(zhì)是由基因組DNA纏繞核小體構(gòu)成的,核小體的核心部分是由組蛋白H2A,H2B,H3和H4各2個(gè)分子構(gòu)成的蛋白8聚體。RNF20/RNF40二聚體（RING finger protein RNF20/RNF40 dimer）是催化人H2B組蛋白120位賴氨酸（lysine）單泛素化（H2Bub1）反應(yīng)的E3泛素連接酶。H2Bub1介導(dǎo)基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控,染色質(zhì)重塑,并在DNA雙鏈斷裂損傷修復(fù)途徑之一的同源重組修復(fù)（Homologous Recombination,HR）中發(fā)揮重要的作用。RNF20/RNF40二聚體的缺失會(huì)導(dǎo)致同源重組修復(fù)中修復(fù)因子不能募集到DNA損傷位點(diǎn)上,導(dǎo)致DNA雙鏈斷裂損傷的累積并影響基因組的穩(wěn)定... 

【文章來(lái)源】：上海師范大學(xué)上海市

【文章頁(yè)數(shù)】：53 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

RNF20/RNF40/WAC復(fù)合物在基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控中的作用

R-loop的結(jié)構(gòu)

第二章WAC與sc35有內(nèi)源性的相互作用上海師范大學(xué)碩士學(xué)位論文10放入稀釋好的二抗中，放在搖床上室溫孵育1.5h，孵育結(jié)束后用1×TBST緩沖液洗膜3次，每次8-10min。6.曝光：將ECL發(fā)光底物A和B兩種試劑等體積混合，取出完成抗體孵育的PVDF膜，放在保鮮膜上，正面朝上，將ECL混合液滴到PVDF膜上，放入化學(xué)發(fā)光成像儀中，調(diào)節(jié)適當(dāng)?shù)钠毓鈺r(shí)間，得到最優(yōu)結(jié)果，最后對(duì)蛋白條帶進(jìn)行分析。2.4實(shí)驗(yàn)結(jié)果2.4.1WAC與sc35兩種蛋白有相互作用圖2-1WAC與sc35內(nèi)源相互作用為了探究WAC與sc35兩種蛋白的相互作用情況，我們進(jìn)行了內(nèi)源性Co-IP實(shí)驗(yàn)，裂解HCT116細(xì)胞獲得全細(xì)胞提取物，加入ProteinAAgrose，WAC抗體或sc35抗體孵育過(guò)夜，通過(guò)ProteinAAgrose結(jié)合兔源抗體將目的蛋白沉淀下來(lái)，然后再進(jìn)行Western-blot實(shí)驗(yàn)，用WAC,sc35以及β-actin抗體進(jìn)行免疫印跡分析，來(lái)研究?jī)?nèi)源性的蛋白相互作用的情況。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖2-1所示，WAC抗體能將sc35蛋白沉淀下來(lái)，同時(shí)sc35抗體也能將WAC蛋白沉淀下來(lái)，而對(duì)作為照的IgG抗體則不能將sc35或WAC蛋白沉淀下來(lái)。β-actin抗體孵育組是本實(shí)驗(yàn)的對(duì)照組。這些結(jié)果表明兩種蛋白質(zhì)WAC與sc35有相互作用。2.5本章小結(jié)降解R-loop的方法有多種，可以防止由于R-loop的累積與轉(zhuǎn)錄復(fù)制碰撞形成的轉(zhuǎn)錄副產(chǎn)物威脅基因組的穩(wěn)定性。sc35，RNF20/RNF40二聚體在維持基因組穩(wěn)定性中都起到了重要的作用。與RNF20/RNF40復(fù)合物的功能一致，sc35的缺失也會(huì)導(dǎo)致R-loop的積累。WAC作為RNF20/RNF40二聚體的重要功能伙伴，與RNF20/RNF40二聚體形RNF20/RNF40/WAC復(fù)合物，共同發(fā)揮生物學(xué)功能。本章我們通過(guò)內(nèi)源性的Co-IP實(shí)驗(yàn)證明WAC與sc35有相互作用，為接下來(lái)WAC與sc35是否在基因轉(zhuǎn)錄與DNA損傷修復(fù)中發(fā)揮作用的研究奠定了基矗


本文編號(hào)：3227606