小立碗蘚（Physcomitrella patens）隸屬葫蘆蘚目（Funariales）葫蘆蘚科（Funariaceae）小立碗蘚屬,屬于非維管束植物,是早期登陸的植物代表。小立碗蘚被灰霉菌侵染后在細(xì)胞壁形成可抵御病原菌的乳突結(jié)構(gòu)。胼胝質(zhì)是形成乳突的主要成分,由胼胝質(zhì)合酶合成。在小立碗蘚基因組中,共有12個(gè)基因編碼胼胝質(zhì)合酶。通過小立碗蘚轉(zhuǎn)錄組測序和實(shí)時(shí)熒光定量PCR得到胼胝質(zhì)合酶PpCalS6基因在接種灰霉菌后的第二天植株中表達(dá)量顯著增加。說明胼胝質(zhì)可能參與了小立碗蘚對灰霉菌的防御反應(yīng),其它研究報(bào)道,胼胝質(zhì)也可能參與植物的生長發(fā)育。本研究擬過反向遺傳學(xué)方法研究PpCalS6的功能,從而證實(shí)胼胝質(zhì)在小立碗蘚中是否參與抵抗病原菌以及影響植株的長發(fā)育。本研究所得結(jié)果如下:1、本研究成功的構(gòu)建了PpCalS6敲除植株。首先構(gòu)建了PpCalS6-PTN182敲除載體,然后利用同源重組技術(shù),通過PEG介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化方法,將PpCalS6-PTN182轉(zhuǎn)入到小立碗蘚原生質(zhì)體中。通過G418兩次不同濃度篩選（25μg/mL,50μg/mL）及分子水平驗(yàn)證,成功的獲得了PpCalS6敲除植株（PpC... 

【文章來源】：貴州師范大學(xué)貴州省

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

小立碗蘚生活史(SchaeferandZrd,2001)

圖 1 小立碗蘚生活史 (Schaefer and Zr d, 2001)Fig.1 The life cycle of P.patens (Schaefer and Zr d, 2001)1.1 胼胝質(zhì)胼胝質(zhì)(callose)，即 β-1,3-葡聚糖（圖 2），由胼胝質(zhì)合酶（亦稱為類葡聚催化合成，廣泛存在于多細(xì)胞綠藻和高等植物中(Scherp, et al., 2001)。利用blue 染色后，可使其在熒光顯微鏡下呈現(xiàn)出黃綠色熒光(Schuette, et al., 2009)。示：一方面植物中胼胝質(zhì)的快速合成或降解參與了植物的生長代謝(Chen a2009)，另一方面胼胝質(zhì)的沉積還可作為一種物理屏障限制或阻止病原體，從而原體的入侵(Allison and S, 1974)。

14圖 3 PpCalS6-PTN182 敲除載體構(gòu)建示意圖Fig.3 PpCalS6-PTN182 knockout vector construction schematic diagram2.2.2 小立碗蘚原生質(zhì)體制備條件的優(yōu)化及活性檢測2.2.2.1 小立碗蘚原絲體的制備


本文編號：3225415