番茄（Solanum lycopersium）是一種世界范圍內(nèi)廣泛種植的蔬菜,酸甜可口的口感以及豐富的營養(yǎng)元素使得番茄深受人們喜愛。蘋果酸是番茄果實中最主要的有機酸之一,其含量的高低顯著的影響了番茄果實的口感與風味。Sl ALMT9是調(diào)控番茄果實蘋果酸積累的關(guān)鍵基因,其在根系的表達使得番茄能夠適應Al³⁺毒害。本研究通過酵母雙雜調(diào)庫,篩選到三個與Sl ALMT9互作的蛋白。獲得研究結(jié)果如下:1.構(gòu)建Sl ALMT9完整CDS序列的p GBKT7釣餌載體,通過酵母雙雜文庫篩選結(jié)合PCR測序獲得了可能與Sl ALMT9基因互作的28個蛋白的基因序列,結(jié)合酵母雙雜點對點驗證以及Sl ALMT9-OE的RNA-seq數(shù)據(jù),我們認為CESA2（Solyc01g087210.2.1）、TEP（Solyc03g005270.2.1）、TP（Solyc05g026540.2.1）三個基因編碼的蛋白與Sl ALMT9互作;2.提取番茄材料AC果實的RNA,通過反轉(zhuǎn)錄獲取CESA2、TEP、TP的c DNA,基于跨膜結(jié)構(gòu)域TMHMM預測和Inter Pro Scan預測構(gòu)建Sl AM... 

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

果皮細胞各細胞器中的蘋果酸代謝途徑(Etienneetal.2013)

華中農(nóng)業(yè)大學 2019 屆碩士研究生學位論文再受 Al3+誘導，但是其基礎(chǔ)的蘋果酸轉(zhuǎn)運功能 的 C 端在響應 Al3+信號時起到了重要作用(TaALMT1 的 C 端進行了截短實驗也表明，在運功能不受影響，但其對 Al3+的響應仍舊依賴有相似的結(jié)果，不過僅有 E256Q（相當于 TaAL變影響了其對 Al3+的響應(Furuichi et al. 20T1 分成 N 端和 C 端并構(gòu)建了嵌合蛋白使其在舊表現(xiàn)出蘋果酸轉(zhuǎn)運能力與 Al3+響應能力，但卻失去了 Al3+響應能力，這一結(jié)果表明 N 端對10; Sasaki et al. 2014)。

之間相互作用的工具(Fields and Song 1989)。其基本交系統(tǒng)使用 GAL4 作為轉(zhuǎn)錄激活因子，該轉(zhuǎn)錄因子A 結(jié)合結(jié)構(gòu)域（DNA Binding domain，BD）和l activation domain，AD），同時具有 BD 與 AD 兩個整功能，激活報告基因的表達(Fields and Song 1989)ait，即釣餌蛋白）與 BD 蛋白結(jié)合，構(gòu)建 BD-Bait 融標蛋白）與 AD 蛋白結(jié)合，構(gòu)建 AD-Prey 融合蛋白。表達后，如果 Bait 與 Prey 能夠發(fā)生互作，將會拉動 AD 能夠發(fā)揮轉(zhuǎn)錄激活作用，激活報告基因的表達，就可以通過釣餌蛋白從文庫中篩選出與之互作的白時，該系統(tǒng)也可以驗證兩個蛋白之間是否存在互作

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3222644