癌癥主要是由基因突變引發(fā)的疾病,其發(fā)生率及死亡率居高不下,嚴(yán)重影響我國(guó)乃至全球人類健康。目前,除了常規(guī)放化療外,針對(duì)各類突變癌基因的靶向治療備受青睞。然而在臨床實(shí)踐中,靶向治療仍然面臨諸多問(wèn)題,比如,一方面腫瘤細(xì)胞能夠逃逸靶基因信號(hào)通路,獲取新的生存方式,從而導(dǎo)致靶向藥物失效;另一方面,很多已知的致癌基因無(wú)法成藥。因此,篩選和鑒定可成藥的靶基因成為解決問(wèn)題的關(guān)鍵。協(xié)同致死效應(yīng)是指當(dāng)某兩個(gè)特定的基因同時(shí)突變失活時(shí),會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞死亡的生物學(xué)效應(yīng);而這兩個(gè)基因單獨(dú)任何一個(gè)突變失活都不會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞死亡。利用這一效應(yīng),PARP抑制劑治療BRCA突變腫瘤的方法應(yīng)運(yùn)而生。此后,基于協(xié)同致死效應(yīng)的功能篩選業(yè)已成為腫瘤領(lǐng)域藥物研發(fā)的重要方向。本研究課題基于協(xié)同致死效應(yīng)在胃腸道腫瘤中篩選靶向突變ERBB3及突變p53基因的新型效應(yīng)分子,并通過(guò)功能研究探究協(xié)同致死分子機(jī)制。課題1,通過(guò)分析癌癥基因組圖譜（the cancer genome atlas,TCGA）數(shù)據(jù)庫(kù),我們發(fā)現(xiàn)ERBB3基因在人類胃腸道癌癥中高頻突變,利用攜帶突變型ERBB3基因（Mut-ERBB3）和野生型ERBB3基因（WT-ERBB3）的... 

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

ERBB3蛋白的熱點(diǎn)突變圖譜

浙江大學(xué)博士學(xué)位論文正文課題1研究?jī)?nèi)容與結(jié)果7Lapatinib（一種HER2的小分子抑制劑），Apatinib（一種VEGFR2的小分子抑制劑），Linsitinib（一種IGF-1R的小分子抑制劑），Tivantinib（一種c-MET的小分子抑制劑）以及BGJ398（一種FGFR1-3的抑制劑）處理72小時(shí)后的細(xì)胞致死效果。細(xì)胞活力的熱圖結(jié)果顯示（如圖1-3），這5株細(xì)胞系對(duì)Gefitinib，Lapatinib，Apatinib，Linsitinib和Tivantinib耐藥響應(yīng)沒(méi)有顯著性的差異。但值得注意的是，攜帶ERBB3-E928G突變的CW-2細(xì)胞系對(duì)FGFR1-3抑制劑BGJ398顯著耐受。圖1-3初步藥物篩選發(fā)現(xiàn)CW-2細(xì)胞系對(duì)BGJ398顯著耐受圖1-3將5種細(xì)胞系分別鋪板于96孔板中，每孔5000個(gè)細(xì)胞。待細(xì)胞貼壁后，配制如圖不同濃度的RTKs抑制劑（包括Gefitinib，Lapatinib，Apatinib，Linsitinib，Tivantinib和BGJ398）分別處理鋪板于96孔板中的5種細(xì)胞系，處理3天后利用Celltiter-Glo方法檢測(cè)細(xì)胞活力，并分析結(jié)果。為了進(jìn)一步證實(shí)此實(shí)驗(yàn)結(jié)果，我們挑選CW-2細(xì)胞系與WT-ERBB3細(xì)胞系A(chǔ)GS同時(shí)給予2.5μM的BGJ398處理，分別在藥物處理3天，5天，7天后檢測(cè)細(xì)胞活力。結(jié)果顯示，WT-ERBB3細(xì)胞系A(chǔ)GS的細(xì)胞活力在FGFR1-3抑制劑BGJ398處理的7天內(nèi)顯著下降，而Mut-ERBB3細(xì)胞系CW-2的細(xì)胞活力幾乎不受影響（如圖1-4）。

浙江大學(xué)博士學(xué)位論文正文課題1研究?jī)?nèi)容與結(jié)果8圖1-4CW-2細(xì)胞系比AGS細(xì)胞系對(duì)BGJ398處理呈現(xiàn)不同時(shí)間點(diǎn)的耐受圖1-4利用培養(yǎng)基配制終濃度為2.5μM的BGJ398，分別處理貼壁于96孔板中的CW-2和AGS細(xì)胞系，在處理3天，5天和7后利用Celltiter-Glo方法檢測(cè)細(xì)胞活力結(jié)果，并分析結(jié)果。BGJ398作為一種選擇性FGFR抑制劑，可以靶向作用于FGFR1/2/3，在無(wú)細(xì)胞試驗(yàn)中對(duì)FGFR1/2/3的IC50分別為0.9nM/1.4nM/1nM[32,33]。然而，F(xiàn)GFR家族成員還包含F(xiàn)GFR4[34]，且目前還沒(méi)有BGJ398對(duì)FGFR4有抑制效果的相關(guān)研究報(bào)道。FGFR4作為成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體FGFR家族成員，其在胃腸道癌癥的發(fā)生發(fā)展中也扮演重要角色，F(xiàn)GFR4的過(guò)表達(dá)和突變都被發(fā)現(xiàn)能夠促進(jìn)胃腸道癌癥細(xì)胞的生長(zhǎng)[35-37]。因此，為了進(jìn)一步探索ERBB3-E928G突變細(xì)胞對(duì)FGFR4抑制劑的腫瘤殺傷響應(yīng)，我們挑選出兩種FGFR4的選擇性抑制劑BLU554和BLU9931，利用不同濃度的BLU554和BLU9931分別處理CW-2和AGS細(xì)胞系，結(jié)果顯示CW-2和AGS細(xì)胞系對(duì)這兩種FGFR4抑制劑的響應(yīng)并沒(méi)有顯著性差異（如圖1-5）。提示ERBB3的E928G突變可能不影響細(xì)胞對(duì)FGFR4抑制劑的腫瘤殺傷響應(yīng)。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]DNA methylation detection methods used in colorectal cancer[J]. Yu-Xia Zhan,Guang-Hua Luo.  World Journal of Clinical Cases. 2019(19)
[2]突變型p53與其合成致死基因的研究進(jìn)展[J]. 劉同陽(yáng),郭海強(qiáng),朱美妍,黃英澤,賈舒婷,羅瑛,張繼虹.  遺傳. 2015(04)



本文編號(hào)：3216959