[目的]構(gòu)建Wnt3a基因沉默的骨質(zhì)疏松（osteoporosis,OP）大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞（bone mesenchymal stem cells,BMSCs）體系,研究 Wnt 通路中 Wnt3a及β-catenin關(guān)鍵分子的表達,并探索老鸛草素干預(yù)其表達的作用。[方法]1.分離去卵巢（ovariectomy,OVX）大鼠的BMSCs,分為假手術(shù)大鼠組、模型大鼠組、模型組BMSCs給予老鸛草素（10-9mol/L）處理,用茜素紅及ALP活性檢測驗證老鸛草素對BMSCs是否有成骨分化的作用。2.RNA芯片技術(shù)檢測各組BMSCs基因表達譜差異,對上調(diào)差異基因的表達進行篩選。并與模型組作比較,對老鸛草干預(yù)后變化的基因,特別是與BMSCs成骨分化相關(guān)的關(guān)鍵基因進行cluster聚類、GO分析、以及pathway功能分布。3.確定上述老鸛草素干預(yù)組中表達上調(diào)的關(guān)鍵基因,采用RNAi沉默技術(shù),針對目的基因設(shè)計構(gòu)建3條干擾序列,并包裝慢病毒,以慢病毒作載體攜帶上述沉默基因轉(zhuǎn)染入BMSCs內(nèi),構(gòu)建穩(wěn)轉(zhuǎn)BMSCs細胞系,并用RTQ-PCR驗證。4.用老鸛草素進行干預(yù)穩(wěn)轉(zhuǎn)BMSCs細胞14d后,采用... 

【文章來源】：昆明醫(yī)科大學(xué)云南省

【文章頁數(shù)】：88 頁

【學(xué)位級別】：碩士

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材料與方法
結(jié)果
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綜述
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