采用PCR技術檢測分離自廣西欽州、北海和防城港3市凡納濱對蝦樣品中的67株副溶血弧菌（Vibrio parahaemolyticus）3種毒力基因tdh、trh和tlh的攜帶情況,并將tlh基因進行原核表達,SDS-PAGE和Western blotting鑒定分析。結果顯示,67株副溶血弧菌均未擴增出tdh和trh基因,而tlh基因檢出率為100.0%,所檢副溶血弧菌的毒力基因型為tdh^-trh^-tlh⁺。成功構建了原核表達質粒pET-28a-tlh,將其轉化至大腸桿菌BL21 （DE3）感受態(tài)細胞后,經IPTG誘導表達,SDS-PAGE電泳檢測得到大小約為53 kDa的產物,與預測值相符。經Western blotting鑒定,該重組表達產物能與抗6×His標簽的單克隆抗體發(fā)生特異性反應。 

【文章來源】：河北漁業(yè). 2020,(08)

【文章頁數(shù)】：5 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 試驗材料
    1.2 試驗方法
        1.2.1 tdh、trh和tlh3種毒力基因檢測
        1.2.2 tlh基因的生物信息學分析
        1.2.3 tlh基因原核表達載體構建
        1.2.4 原核表達載體的誘導表達
        1.2.5 原核表達產物SDS-PAGE和Western blotting鑒定
2 結果與分析
    2.1 tdh、trh和tlh 3種毒力基因檢測
    2.2 tlh基因生物信息學分析
    2.3 tlh基因的蛋白表達及鑒定
3 討論


【參考文獻】：
期刊論文
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[2]寧波地區(qū)腹瀉患者副溶血弧菌毒力基因及耐藥性分析[J]. 謝紅意,葉鴻雁,周方滿,施露梅,葛婷婷,樂旭波.  檢驗醫(yī)學. 2019(02)
[3]近岸及河口環(huán)境中副溶血弧菌的生態(tài)適應性及其主要毒力基因分布特征[J]. 李夢飛,明紅霞,樊景鳳,王斌.  生命科學. 2019(02)
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博士論文
[1]抗副溶血弧菌TLH單鏈抗體的淘選與功能研究[D]. 王榮智.福建農林大學 2012
[2]副溶血弧菌tdh、trh和tlh基因的克隆、表達及基因敲除對其溶血活性的影響[D]. 趙永剛.中國海洋大學 2010

碩士論文
[1]海水養(yǎng)殖源弧菌耐藥性調查與致病性弧菌毒力基因檢測[D]. 胡夢華.上海海洋大學 2015
[2]鋸緣青蟹副溶血性孤菌分離鑒定及抗TLH單克隆抗體的制備[D]. 陳華.福建農林大學 2007



本文編號：3190048