發(fā)布時(shí)間：2021-05-16 16:47

　　采用PCR技術(shù)檢測(cè)分離自廣西欽州、北海和防城港3市凡納濱對(duì)蝦樣品中的67株副溶血弧菌（Vibrio parahaemolyticus）3種毒力基因tdh、trh和tlh的攜帶情況,并將tlh基因進(jìn)行原核表達(dá),SDS-PAGE和Western blotting鑒定分析。結(jié)果顯示,67株副溶血弧菌均未擴(kuò)增出tdh和trh基因,而tlh基因檢出率為100.0%,所檢副溶血弧菌的毒力基因型為tdh^-trh^-tlh⁺。成功構(gòu)建了原核表達(dá)質(zhì)粒pET-28a-tlh,將其轉(zhuǎn)化至大腸桿菌BL21 （DE3）感受態(tài)細(xì)胞后,經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá),SDS-PAGE電泳檢測(cè)得到大小約為53 kDa的產(chǎn)物,與預(yù)測(cè)值相符。經(jīng)Western blotting鑒定,該重組表達(dá)產(chǎn)物能與抗6×His標(biāo)簽的單克隆抗體發(fā)生特異性反應(yīng)。 

【文章來(lái)源】：河北漁業(yè). 2020,(08)

【文章頁(yè)數(shù)】：5 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 試驗(yàn)材料
    1.2 試驗(yàn)方法
        1.2.1 tdh、trh和tlh3種毒力基因檢測(cè)
        1.2.2 tlh基因的生物信息學(xué)分析
        1.2.3 tlh基因原核表達(dá)載體構(gòu)建
        1.2.4 原核表達(dá)載體的誘導(dǎo)表達(dá)
        1.2.5 原核表達(dá)產(chǎn)物SDS-PAGE和Western blotting鑒定
2 結(jié)果與分析
    2.1 tdh、trh和tlh 3種毒力基因檢測(cè)
    2.2 tlh基因生物信息學(xué)分析
    2.3 tlh基因的蛋白表達(dá)及鑒定
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]蝦源副溶血弧菌致病基因檢測(cè)與ERIC-PCR分型[J]. 張海強(qiáng),安偉,肖雨.  上海海洋大學(xué)學(xué)報(bào). 2019(06)
[2]寧波地區(qū)腹瀉患者副溶血弧菌毒力基因及耐藥性分析[J]. 謝紅意,葉鴻雁,周方滿,施露梅,葛婷婷,樂(lè)旭波.  檢驗(yàn)醫(yī)學(xué). 2019(02)
[3]近岸及河口環(huán)境中副溶血弧菌的生態(tài)適應(yīng)性及其主要毒力基因分布特征[J]. 李夢(mèng)飛,明紅霞,樊景鳳,王斌.  生命科學(xué). 2019(02)
[4]副溶血弧菌臨床分離株的血清分型及毒力基因分析[J]. 代敏,王大鵬,陳萬(wàn)義,史賢明.  中國(guó)食品學(xué)報(bào). 2013(02)
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[6]寧波市小水產(chǎn)品中副溶血性弧菌的血清型、毒力及耐藥性研究[J]. 徐奮奮,徐景野,宋啟發(fā),裘立曉,陳美芬,金曉霞.  中國(guó)食品衛(wèi)生雜志. 2007(04)
[7]副溶血弧菌的分子生物學(xué)研究進(jìn)展[J]. 蔡潭溪,蔣魯巖,黃克和.  中國(guó)人獸共患病雜志. 2005(10)
[8]副溶血弧菌tlh基因的克隆、表達(dá)及功能的研究[J]. 李志峰,聶軍,戴迎春,劉翼,陳清,俞守義.  中國(guó)人獸共患病雜志. 2004(03)

博士論文
[1]抗副溶血弧菌TLH單鏈抗體的淘選與功能研究[D]. 王榮智.福建農(nóng)林大學(xué) 2012
[2]副溶血弧菌tdh、trh和tlh基因的克隆、表達(dá)及基因敲除對(duì)其溶血活性的影響[D]. 趙永剛.中國(guó)海洋大學(xué) 2010

碩士論文
[1]海水養(yǎng)殖源弧菌耐藥性調(diào)查與致病性弧菌毒力基因檢測(cè)[D]. 胡夢(mèng)華.上海海洋大學(xué) 2015
[2]鋸緣青蟹副溶血性孤菌分離鑒定及抗TLH單克隆抗體的制備[D]. 陳華.福建農(nóng)林大學(xué) 2007



本文編號(hào)：3190048