香菇（Lentinula edodes（Berk.Pegler））是世界上最主要的人工栽培食用菌之一。目前主要栽培原料是櫟木屑,基質(zhì)轉(zhuǎn)化率偏低,林木資源消耗量較大,而農(nóng)作物秸稈還無法大量替代櫟木屑進(jìn)行香菇栽培。前期研究中發(fā)現(xiàn),香菇栽培菌株武香一號W1中6個木質(zhì)素降解酶與稻草基質(zhì)降解能力相關(guān),包括4個漆酶（LCC9,LCC12,LCC13,LCC14）,1個錳過氧化物酶（MNP2）和1個乙二醛氧化酶（GLOX）。本課題開展了香菇木質(zhì)素降解酶基因在櫟木屑和稻草兩種基質(zhì)中的表達(dá)模式分析,并對木質(zhì)素降解酶基因lcc12和glox的功能進(jìn)行了分析。采用熒光定量PCR檢測了38個香菇核心種質(zhì)（包括22個野生菌株,16個栽培菌株）6個木質(zhì)素降解酶基因在櫟木屑和稻草基質(zhì)中的表達(dá)水平。結(jié)果表明,野生菌株6個木質(zhì)素降解酶基因在稻草基質(zhì)中的表達(dá)量普遍高于櫟木屑。3個野生菌株（Y1,Y78,Y94）各有4個木質(zhì)素降解酶基因（Y1（glox,lcc12,lcc13和lcc14）;Y78（lcc9,lcc12,lcc13和lcc14）;Y94（lcc9,lcc13,lcc14和mnp2））在稻草基質(zhì)中表達(dá)量高于櫟... 

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略詞表
1 前言
    1.1 香菇概述
        1.1.1 香菇生物學(xué)特性
        1.1.2 香菇的食用價值和藥用價值
        1.1.3 香菇核心種質(zhì)
        1.1.4 香菇栽培史及栽培模式
    1.2 農(nóng)作物秸稈及其在食用菌產(chǎn)業(yè)中的應(yīng)用
        1.2.1 我國農(nóng)作物秸稈概況
        1.2.2 農(nóng)作物秸稈在食用菌栽培中的應(yīng)用
    1.3 木質(zhì)素簡介
    1.4 木質(zhì)素降解酶
        1.4.1 木質(zhì)素降解酶的作用機理
        1.4.2 木質(zhì)素降解酶在食用菌中的應(yīng)用研究
    1.5 課題的研究目的與意義
2 材料與方法
    2.1 試驗材料
        2.1.1 供試菌株
        2.1.2 木質(zhì)素降解酶
        2.1.3 供試培養(yǎng)基配制
        2.1.4 細(xì)菌菌株
        2.1.5 質(zhì)粒
        2.1.6 試劑
    2.2 香菇木質(zhì)素降解酶基因在不同基質(zhì)中的表達(dá)模式分析
        2.2.1 核心種質(zhì)菌絲培養(yǎng)及性狀測定
        2.2.2 核心種質(zhì)RNA的提取與檢測
        2.2.3 第一鏈cDNA的合成
        2.2.4 引物合成
        2.2.5 qRT-PCR分析
        2.2.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析
    2.3 香菇木質(zhì)素降解酶基因lcc12和glox的功能分析
        2.3.1 引物設(shè)計
        2.3.2 重組質(zhì)粒p1300-g-lcc12和p1300-g-glox的構(gòu)建
        2.3.3 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的香菇異核菌絲的轉(zhuǎn)化
        2.3.4 香菇轉(zhuǎn)化子的鑒定
        2.3.5 轉(zhuǎn)化子菌絲體性狀測定
        2.3.6 轉(zhuǎn)化子漆酶和錳過氧化物酶活性測定
        2.3.7 轉(zhuǎn)化子子實體農(nóng)藝性狀分析
3 結(jié)果與分析
    3.1 核心種質(zhì)木質(zhì)素降解酶基因在木屑和稻草中表達(dá)水平分析
        3.1.1 核心種質(zhì)菌絲總RNA的提取及反轉(zhuǎn)錄
        3.1.2 6個木質(zhì)素降解酶基因在木屑和稻草基質(zhì)中表達(dá)水平的分析
        3.1.3 同一基質(zhì)中菌絲長速與基因表達(dá)的相關(guān)性分析
        3.1.4 同一基質(zhì)中6個木質(zhì)素降解酶基因表達(dá)的相關(guān)性分析
    3.2 香菇木質(zhì)素降解酶基因lcc12和glox的功能分析
        3.2.1 目的基因條帶擴(kuò)增
        3.2.2 p1300-g-lcc12/glox克隆載體的鑒定
        3.2.3 香菇lcc12和glox轉(zhuǎn)化子的篩選
        3.2.4 轉(zhuǎn)化子的PCR鑒定
        3.2.5 轉(zhuǎn)化子基因表達(dá)量的測定
        3.2.6 lcc12和glox轉(zhuǎn)化子菌絲生長速度分析
        3.2.7 lcc12和glox轉(zhuǎn)化子漆酶和錳過氧化物酶酶活分析
        3.2.8 lcc12和glox轉(zhuǎn)化子子實體階段農(nóng)藝性狀分析
4 討論
    4.1 關(guān)于香菇木質(zhì)素降解酶基因在稻草和木屑基質(zhì)中的表達(dá)差異問題
    4.2 關(guān)于香菇漆酶和錳過氧化物酶協(xié)同表達(dá)的問題
    4.3 關(guān)于香菇木質(zhì)素降解酶基因結(jié)構(gòu)及表達(dá)量的問題
    4.4 香菇木質(zhì)素降解酶基因轉(zhuǎn)化子表型分析
    4.5 木質(zhì)素降解酶功能與香菇新型基質(zhì)開發(fā)
參考文獻(xiàn)
致謝
附錄1


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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[2]香菇重要農(nóng)藝性狀的QTL定位[D]. 龔文兵.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014
[3]根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的靈芝遺傳轉(zhuǎn)化體系的建立及其在靈芝三萜生物合成研究中的應(yīng)用[D]. 師亮.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012

碩士論文
[1]草菇（Volvariella volvacea）YL-93液體菌種及熟料栽培研究[D]. 楊璐.沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué) 2017
[2]香菇秸稈栽培配方改良及優(yōu)良菌株篩選[D]. 王菲.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué) 2017
[3]基于候選基因標(biāo)記的香菇重要農(nóng)藝性狀關(guān)聯(lián)分析[D]. 向星潔.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2015
[4]錳過氧化物酶基因在畢赤酵母中的表達(dá)及其降解玉米秸稈中木質(zhì)素能力的研究[D]. 王嬌.河南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014
[5]幾種林果植物廢棄物在香菇栽培中的應(yīng)用研究[D]. 張健.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013
[6]農(nóng)桿菌介導(dǎo)的香菇遺傳轉(zhuǎn)化體系構(gòu)建[D]. 喻晶晶.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
[7]中國香菇自然種質(zhì)遺傳多樣性SRAP和IGS2分析[D]. 吳茜.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2010
[8]新疆核桃種質(zhì)資源遺傳多樣性分析[D]. 李超.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué) 2010
[9]雙孢蘑菇高效栽培及其對秸稈生物降解的研究[D]. 李燕榮.中南林業(yè)科技大學(xué) 2010



本文編號：3188377